第十章 酶的作用机制和酶的调节.docx

第一节 酶的活性部位

一、酶活性部位的特点

只是酶分子的一小部分；通过诱导契合形成与底物互补的特定三维结构；通过次级键与底物相互作用；有一定的柔性（邹承鲁的对比研究发现活性部位的柔性比其他部位更强）；包括底物结合基团和催化基团，但二者的区分有时并不严格。

二、研究酶活性部位的方法

（一）侧链基团的化学修饰法

非特异性共价修饰（作用于酶分子中某一基团），酶活力丧失与修饰剂浓度成比例，底物或竞争性抑制剂可降低修饰作用。特异性共价修饰（作用于特定酶的特定基团），如二异丙基氟磷酸（DFP）只与胰凝乳蛋白酶活性部位的丝氨酸羟基结合；亲和标记试剂可以与活性部位的特定基团共价定量结合，如对甲苯磺酰-L-苯丙氨酰氯甲基酮(TPCK)与胰凝乳蛋白酶活性部位丝氨酸羟基的结合。

（二）动力学参数测定法

（三）X-射线晶体结构分析法

（四）定点诱变法

第二节 酶催化反应的独特性质

第三节 影响酶催化效率的有关因素

一、底物和酶的邻近效应(approximation，proximity)与定向效应(orientation)

底物分子结合到酶的活性中心，使底物在酶活性中心的有效浓度大大增加，从而加快反

应的速度。

一个有机化学模型。咪唑催化对硝基苯酯的水解，分子内反应比分子间反应快24倍。

底物分子中参与反应的基团相互接近，并被严格定向定位，使酶促反应具有高效率称定向效应。

邻羟基苯丙酸内脂的形成反应，两个甲基使羧基和羟基更好的定向，使反应速率提高

2.5×1011。

二、底物的形变(distortion)和诱导契合(inducednt)

脯氨酸消旋酶的过渡态类似物与酶的亲和力远大于其底物，说明酶可以引起底物的形变。

酵母醛缩酶的过渡态类似物与酶的亲和力远大于其底物，说明酶可以引起底物的形变。小牛小肠腺苷脱氨酶的过渡态类似物与酶的亲和力远大于其底物，说明酶可以引起底物

的形变。

三、酸碱催化(acid—basecatalysis)

专一性（狭义）酸碱催化总酸碱催化或广义酸碱催化

表观速度常数依赖于pH和溶液浓度。

Brφnsted催化作用定律：

Logka=CA?α(pKa)

pKa和pKb是总酸碱的解离常数，ka和kb是反应的速度常数。CA和CB为常数，与反应类型、温度、溶剂等因素有关。

pKa小，则H+浓度高。

α和β是Brφnsted系数，范围在0到1之间，接近于1为专一性酸碱催化，接近于0

表示酸碱催化不起作用。

Logkb=CBβ(pKb)

咪唑基的pK值接近生理pH值，H+的传递速度快，是酸碱催化中最重要的基团。

四、共价催化

酶与底物形成共价键的3个例子，其共同特点是酶的亲核中心X进攻底物的亲电中心。

五、金属离子催化

金属酶含紧密结合的金属离子。金属激活酶含松散结合的金属离子。金属离子的作用主要有：

与结合底物为反应定向；参与氧化还原反应；

稳定或屏蔽负电荷；活化水分子；

与过渡态底物形成螯合物。

六、多元催化和协同效应

酶的催化过程通常是多种机制同时作用，相互协同，因而有很高的催化效率。

七、活性部位微环境的影响

第四节 酶催化反应机制的实例

一、溶菌酶(1ysozyme)

溶菌酶的结构

溶菌酶的结构

白色为Glu35和Asp52

二、胰核糖核酸酶A(pancreaticribonucleaseA，RNaseA)

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牛咦核糖核酸酶的氨基酸寒序

核糖核酸酶的实体模型

3个关键性的侧链His11,、Hisn和 Ly和

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三、羧肽酶A(carboxypeptidaseA)

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