酶分析和总结.docxVIP

酶

1、称取25mg蛋白酶粉配制成25毫升酶溶液，从中取出0.1毫升酶液，以酪蛋白为底物，用Folin-酚比色法测定酶活力，得知每小时产生1500微克酪氨酸。另取2毫升酶液，用凯氏定氮法测得蛋白氮为0.2毫克（蛋白质中氮的含量比较固定：16％）。若以每分钟产生l微克酪氨酸的酶量为1个活力单位计算。根据以上数据求：（a）1毫升酶液中所含蛋白质量及活力单位。（b）比活力。（c）1克酶制剂的总蛋白含量及总活力。

答:（a）0.625mg，250单位（b）400单位/mg（c）0.625g,2.5×105单位

2、从肝细胞中提取的一种蛋白水解酶的粗提液300ml含有150mg蛋白质，总活力为360单位。经过一系列纯化步骤以后得到的4ml酶制品（含有0.08mg蛋白），总活力为288单位。整个纯化过程的收率是多少？纯化了多少倍？

答:80％；1500倍。。

3、1/v对1/[S]的双倒数作图得到的直线斜率为1.2×10-3min，在1/v轴上的截距为2.0×10-2nmol-1mlmin。计算Vmax和Km。

答：Vmax＝50nmolml-1min-1；Km＝6.0×10－2nmolml-1

4、一个二肽酶对二肽Ala-Gly和二肽Leu-Gly的Km分别为2.8×10-4和3.5×10-2，哪一个二肽是酶的最适底物？该酶的两个非竞争性抑制剂的Ki值分别为5.7×10-2和2.6×10-4。哪一个是最强的抑制剂？

答：Ala-Gly是最适底物；Ki值最小的那个是最强的抑制剂。

5、根据米式方程求（a）Kcat为30s-1，Km为0.005M的酶，在底物浓度为多少时，酶促反应的速度为1/4Vmax？（b）底物浓度为1/2Km，2Km和10Km时，酶促反应的速率分别相当于多少Vmax？

答：（a）1.7×10-3M（b）0.33;0.66;0.91

6、延胡索酸酶催化延胡索酸水化生成L-苹果酸：见图

该酶由四个相同的亚基组成，分子量为194,000。下面表格中的数据是延胡索酸作为底物，初始水化速

率是在pH5.7，25℃下，酶浓度2×10-6M时得到的。用双倒数作图求出延胡索酸酶在这些条件下的V

，

max

k 和K。

cat m

见图

答：首先要分别计算出底物浓度和产物生成初始速度的倒数（注意在计算和绘图过程中选取合适的数值及单位），然后作图。1/Vmax＝0.20mmol-Lmin所以Vmax＝5.0mmolL-1min-1－1/Km＝－0.5mM-1Km

＝2.0mM或2.0×10-3Mkcat可以通过用Vmax除以[E]total而得到，[E]total为酶活性中心的浓度。因为延胡索酸酶由4个相同的亚基构成，即每一个四聚体的酶分子有四个活性部位，浓度为2×10-6M的延胡索酸酶可以表示为8×10-6M浓度的活性部位，或8×10-3mmol.L－1。kcat的单位为S－1。

7、红细胞中的碳酸酐酶（Mr30000），具有很高的转换数。它催化CO2的可逆水合反应。HO十CO＝＝

2 2

H2CO3此反应对CO2从组织运往肺部很重要。如果10mg的纯碳酸酐酶，37℃下一分钟内以最大速度可催化0.3gCO2的水合反应。碳酸酐酶的转换数（Kcat）是多少？。

答：2.0×107min-1或3.4×105s-1

8、许多酶会受到重金属离子，如Hg2+、Cu2+、Ag+等的不可逆抑制。这类重金属与酶中的活性巯基作用而使酶失活。E-SH＋Ag+→E-S-Ag+＋H＋Ag+

与巯基的亲和性如此之大，以至于Ag+可以用于-SH的定量滴定。欲使含有1.0mg/ml纯酶的10ml酶液完全失活，需加入0.342mmol的AgNO3。计算此酶的最小分子量。为什么能用此法计算酶的最小分子量？

答：29,000;需要假定每一个酶分子只含有一个可滴定的巯基。

9、酶溶液加热时，随着时间的推移，酶的催化活性逐渐丧失。这是由于加热导致天然酶的构象去折叠。己糖激酶溶液维持在45℃12分钟后，活性丧失百分之五十。但是若己糖激酶与大量的底物葡萄糖共同维持在45℃12分钟，则活性丧失仅为3％。请解释，为什么在有底物存在下，己糖激酶的热变性会受到抑制？

答：酶-底物复合物比单独的酶更稳定。

10、新掰下的玉米的甜味是由于玉米粒中的糖浓度高。可是掰下的玉米贮存几天后就不那么甜了，因为50％糖已经转化为淀粉了。如果将新鲜玉米去掉外皮后浸入沸水几分钟，然后于冷水中冷却，储存在冰箱中可保持其甜