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酶工程

酶的定义及其本质：指一类具有高效率的特异性的生物催化剂。

酶是具有催化活性的：蛋白质(enzyme),核酸(ribozyme),或脱氧核酸(deoxyribozyme).

酶工程：它是一项利用酶、含酶细胞器或细胞作为生物催化剂来完成重要化学反应，并将相应底物转化成有用物质的应用型生物高新技术。1971年，美国，第一届国际酶工程会议，确认：酶工程的核心内容酶的生产与应用

主要涉及：①酶的产生；②酶的分离纯化；③酶的固定化；④酶分子的定向改造与修饰；⑤酶生物反应器；⑥酶的应用。

第一章酶的命名和分类国际系统分类法及编号（EC编号）

系统编号方法是将每一种酶用4个数字编号，中间以“.”隔开。第一个数字表示反应性质，分六大类，用1、2、3、4、5、6表示；第二个数字表示亚类，根据底物被作用的基团或键的特点标号；

第三个数字表示亚亚类，更精确反应了所催化反应底物或反应物的性质

第三个数字表示亚亚类下的个别酶的顺序号，一般按酶的发现先后次序进行排列。

1961年国际酶学委员会（EnzymeCommittee,EC）根据酶所催化的反应类型和机理，把酶分成6大类：1氧化还原酶，2转移酶，3水解酶，4裂合酶，5异构酶，6合成酶

酶的组成：单纯酶，结合酶（全酶）=酶蛋白+辅助因子

辅助因子：辅酶，辅基，金属激活剂（金属离子作为辅助因子）

酶的催化专一性主要决定于酶蛋白部分。辅助因子通常是作为电子，原子或某些化学基团的载体。酶的分子结构：活性部位和必需基团

必需基团：这些基团若经化学修饰使其改变，则酶的活性丧失。

活性部位：酶分子中直接与底物结合，并和酶催化作用直接有关的部位。(结合基团——专一性，催化基团——催化性质)

维持酶的空间结构

酶活性中心特点：1）活性中心的某些功能基因是酶的必须基团。2）活性中心只占酶分子的很小一部分3）酶的活性中心是一个三维实体4）酶的活性中心并不是和底物的形状正好互补的5）酶的活性中心是位于酶分子表面的一个裂缝内6）酶与其专一性底物的结合通过次级键实现的

酶催化作用的特点：温和性，专一性，高效性，可调性

酶含量的调节（合成和降解），酶活性的调节共价调节；别构调节；（协同效应，同/异促效应）；反/前馈调节；激素调节；同工酶调节

第二节酶反应动力学

酶活力与酶促反应速度

酶活力：在一定条件下，酶催化某一反应的反应速度（一般测初速度）。酶促反应速率：单位时间、单位体积中底物的减少量或产物的增加量。单位：浓度/单位时间

米氏方程

米氏常数的意义：Km称为米氏常数，是当反应速率为最大反应速率一半时的底物浓度，单位为浓度单位。

Km是酶的特征性常数之一，只与酶的性质有关，与酶的浓度无关；不同的酶其Km不同。但指在一定的温度、pH、离子强度、一定的底物存在下而言的。

Km表示酶与底物之间的亲和程度，Km越大，表示亲和程度越小，酶的催化活性越低；Km越小亲和程度大，酶的活性越高。

Km值可帮助判断某一代谢的方向及生理功能。催化可逆反应的酶，对正逆两个方向反应的Km常常是不同的。测定这些Km的大小及细胞内正逆两向的底物浓度，可以大致推测该酶催化正逆两向反应的效率；这对了解酶在细胞内的主要催化方向及生理功能具有重要的意义。

判断酶的最适底物。有的酶可作用多种底物，因此对每一个底物都有一个Km值，Km最小的那个底物为该酶的最适底物或天然底物。

测定不同抑制剂对某个酶的Km及Vmax的影响，可区别抑制剂是竞争性的还是非竞争性的抑制剂。KM与VmaX的算法

影响酶促反应速度的因素：底物浓度，酶浓度，温度，pH值，激活剂，抑制剂抑制剂的分类：不可逆抑制作用：1.非专一不可逆抑制剂2.专一性不可逆抑制剂

可逆抑制作用：1.竞争性抑制作用2.非竞争性抑制作用3.反竞争性抑制作用4.线性混合型抑制作用。

Ks型不可逆抑制剂：根据底物的化学结构而设计的抑制剂，具有和底物类似的结构，可以和相应的酶相结合，同时所带活泼化学基团化学修饰酶分子中必需基团从而抑制酶的活性。这种抑制剂是通过其对酶的亲和力而对酶进行修饰标记的，所以又称亲和标记试剂。

Kcat型不可逆抑制剂（自杀性底物）：具有与天然底物相类似的结构，本身也是酶的底物，被酶催化后，潜伏性的反应基团因酶的催化而暴露或活化，作用于酶的活性中心或辅基，使酶被共价修饰而失活。

第三节酶活力及其测定

酶活力（enzymeactivity）又称酶活性，是指酶催化某一化学反应的能力。

酶活力大小就是指在一定条件所催化的某一化学反应速度的快慢，即酶催化的反应速度越快，酶活力越高，反之则表示该酶活力低。

常用的酶活力单位有三种：

国际单位(IU)

这种单位是由国际酶学委员会