细胞融合和体细胞杂交幻灯片PPT.pptx

细胞融合和体细胞杂交幻灯片PPT

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远源杂交

·远缘杂交：不同种属之间，或是地理上远缘的种

内亚种之间个体的交配称为远缘杂交。

·由于种属间存在着种种隔离机制，致使远缘杂交

常表现不亲和或获得的远缘杂种表现不育。

·不亲和性：在有性生殖过程中，由于个体细胞或组

织水平上的不协调而使受精或接合不能正常进行，或是受精后不能产生后代的现象。

·双亲个体间基因型的不协调或是染色体组非同源性

在生殖生理表型上的一种反映。不亲和性是稳定物种的重要机理。

·种间不亲和性：异种、异属生物个体之间的生殖不

亲和现象常由染色体组的不同所造成。一般地说，越是远缘则不亲和性越高，直到完全不能受精。

第六章细胞杂交(融合)技术

一、定义

1,细胞融合(cellfusion)

广义：凡是将两个细胞或原生质体融合成一个细胞的过程。包括体细胞、性细胞的融合和自发融合。就植物而言，又称为原生质体融合(protoplastfusion)。

狭义：将不同的体细胞融合在一起，通过对杂种细胞的筛选，培养，期望得到体细胞杂种的一种手段。所以又称为体细胞杂交(somatichybridazation)。

细胞融合=原生质体融合=体细胞杂交

Hyhridcell

Grawsinmedinmthatwilnetmpportgrowthofparenteplls.

MappingbyCellHybridization

MousecellHumancel

αb+

a+b-

ab+

比较内容

体细胞杂交

有性杂交

时间

无季节限制

花期限制，特别是母本的花期

亲缘关系

一定程度上可以克

服有性/嫁接不亲

和性

受亲和性影响

结果

细胞核、细胞质均

可以重组、倍性增

加

双受精，一般无细胞质重组，倍性不

改变

体细胞杂交与有性杂交的异同

第二节体细胞杂交步骤：

1原生质体的制备

2原生质体的融合

3杂种细胞选择

4杂种细胞培养

5由愈伤组织再生植株

6杂种植株的鉴定

原生质体融合

自发融合：

·自然界中：受精、双受精、花粉母细胞融合等。

·在原生质体制备和培养过程中：细胞壁被分解后，原生质体的胞间连丝发生膨大，相邻细胞

的原生质和细胞器通过胞间连丝流到一起，形成融合。此现象在同种或同品种植物间发生，但

频率极低。

诱导融合：通过诱导剂的作用，使两个远缘的原生质体产生融合的方法，是细胞融合中常用的手段

磷脂双分子展

细胞膜的结构示意图

瓣膜的电镜照片

否白质分子

排香白

细胞融合的方法

化学方法物理方法生物方法

仙台病毒(Sendaivirus)

聚乙二醇

NaNO₃

高PH-高浓度Ga²+

PEG)

处理

电脉冲

NaNO₃处理

1909年，Kuster在一个发生了质壁分离的表皮细胞中，低渗NaNO₃溶液可以引起2个亚原生质体的融合。

缺点：异核体形成频率不高，对细胞毒害大，融合

率低(0.1%),重复难。

高PH-高浓度钙离子处理

1973年，Keller和Melchers,用强碱性(pH10.5)的高浓度钙离子(50mmol.L-1)溶液在37℃下处理约30min,两个品系的烟草叶肉原生质体很容易融合。

但对于有些原生质体系统，这样高的PH值是有毒的。

PEG(聚乙二醇)处理

PEG的作用机理：由于PEG分子具有轻微的负极性，故可以与具有正极性基团的水、蛋白质和碳水化合物等形成H键，从而在原生质体之间形成分子桥，其结果是使原生质体发生粘连进而促使原生质体的融合。

另外，PEG能增加类脂膜的流动性，也使原生质体的核、细胞器发生融合成为可能。

十

PEG被洗掉

PEG法示意图

+

桥梁

电荷重排

膜接触

+

PEG融合所需试剂

·融合液：pH5.6

CaCl₂8-10mmol

KH₂PO₄0.7mmol

甘露醇或山梨醇0.5-1.0mol

·诱导液：融合液+PEG20～45%

PEG作为融合剂的优点：

异核体形成的频率高，可重复性强。

缺点：

有一定毒性，容易形成多个细胞的融合体；分裂频率低。

电融合

电场来诱导细胞彼此连接成串，再施加瞬间强