课题微生物的实验室培养.ppt

4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。第31页,共56页，星期六，2024年，5月（二）纯化大肠杆菌接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法①平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面.在数次划线后,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落.第32页,共56页，星期六，2024年，5月平板划线操作1.将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红2.在火焰旁冷却接种环、并打开棉塞第33页,共56页，星期六，2024年，5月3.将试管口通过火焰。5.将试管口通过火焰，并塞上棉花。4.将已冷却的接种环伸入菌液中，沾取一环菌液。不能使用脱脂棉，否则容易吸水，造成污染。第34页,共56页，星期六，2024年，5月一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。6.左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基。第35页,共56页，星期六，2024年，5月8.将平板倒置，放入培养箱中培养。7.灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作。在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区域的划线与第一区域相连。第36页,共56页，星期六，2024年，5月1.接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次.2.划线首尾不能相接3.划线后,培养皿倒置培养划线分离法注意事项:其他画线分离图：第37页,共56页，星期六，2024年，5月不同的平板划线法第38页,共56页，星期六，2024年，5月培养基表面的单菌落第39页,共56页，星期六，2024年，5月1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。讨论：第40页,共56页，星期六，2024年，5月2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。第41页,共56页，星期六，2024年，5月6支试管，分别加入9ml无菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106⑵稀释涂布平板法：a.梯度稀释菌液：菌液微量移液器第42页,共56页，星期六，2024年，5月⑵稀释涂布平板法：a.梯度稀释菌液：b.涂布平板：不超过0.1ml各梯度分别涂布3个平板1个不涂布作空白对照滴灼冷涂稀释103倍稀释104倍稀释105倍第43页,共56页，星期六，2024年，5月第44页,共56页，星期六，2024年，5月稀释涂布法第45页,共56页，星期六，2024年，5月涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？答：应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等。讨论第46页,共56页，星期六，2024年，5月结果分析与评价培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同（一）培养基的制作是否合格如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。（二）接种操作是否符合无菌要求如果培养基上生长的菌落的颜色、形状大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记录第47