生物质能源转化原理与技术实验指导书.docx

《生物质能源转化原理与技术》

课堂实验/实践指导书

课程中文名称：生物质能源转化原理与技术

课程英文名称：BiomassEnergyTransformationPrinciple

课程编号：021060380

适用专业：新能源科学与工程

学时数：总课时32（理论课28+实验4）

学分数：2

课程类别：专业课程

应开课学期：第七学期

实验/实践一：培养基的制备及厌氧菌群的培养

实验/实践类型：演示实验/实践学时：2实验/实践要求：必做

一、实验/实践目的

掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗；

掌握培养基的配置方法以及厌氧菌的培养方法；

掌握干热灭菌和高压蒸汽灭菌的操作方法；

加深对理论知识的理解，培养动手和动脑相结合的实际操作能力。

实验/实践内容

1.根据要求清洗各种玻璃器皿；

2.根据要求配制培养基，用高压蒸汽灭菌锅对所配各培养基灭菌；

对矿井水中的厌氧菌群进行培养。

三、实验材料及仪器设备

1.培养基配方

1）产甲烷菌富集基：

每1000mL矿井水中加入1.0gNH4Cl、0.1gMgCl2·6H2O、0.4gK2HPO4·3H2O、0.2gKH2PO4、0.2gNa2S、2.0gNaHCO3、0.001gC12H7NO4、0.5gC3H7NO2S、2.0gHCOONa、2.0gCH3COONa、1.0g酵母膏、0.1g胰蛋白胨和10mL微量元素液。

2）微量元素液：

每1000mL无菌去离子水中加入氨基三乙酸1.5g、MnSO4·2H2O0.5g、MgSO4·7H2O3.0g、FeSO4·7H2O0.1g、NaCl1.0g、CoCl2·6H2O0.1g、CaCl2·2H2O0.1g、CuSO4·5H2O0.01g、ZnSO4·7H2O0.1g、H3BO30.01g、AlK(SO4)20.01g、NiCl2·6H2O0.02g、Na2MoO40.01g。

2.仪器设备

恒温培养箱，往复式恒温摇床，pH计，血清瓶及配套设备，市售医用一次性无菌注射器。

四、实验/实践原理、方法、手段和步骤

一、实验原理：

在培养厌氧微生物时，需要消除环境中的氧气并降低培养基的氧化还原势。

消除氧气的方法有物理、化学和生物方法，或它们的综合使用。简单地介绍如下：(1).通无氧气体。向厌氧微生物培养的小环境和培养基中通入无氧气体，如高纯氮气和二氧化碳，即可基本驱除其中的氧气。(2).添加还原剂。向培养厌氧微生物的培养基中添加还原剂，如半胱氨酸和硫化钠，可消除其中的氧，降低培养基的氧化还原势。(3).碱性焦性没食子酸法。焦性没食子酸与碱溶液作用后形成易被氧化的碱性没食子盐，能通过氧化作用而形成黑、褐色的焦性没食子橙，从而除掉密封容器中的氧。该法操作简单，无需特殊和昂贵的设备，但其除氧速度较慢。对于一些厌氧要求较高的微生物，如产甲烷菌，单一的除氧方法无法达到其生长所需的厌氧程度，常需结合两种除氧方法。如对培养基进行除氧，制作预还原培养基时，常先向培养基中通高纯氮气，先去除培养基中的绝大部分的氧后，再往培养基中添加适量的还原剂，即可制成高度无氧的预还原培养基。

二、实验步骤

1.玻璃器皿的洗涤

玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。

2.液体培养基的配制过程

称量：一般可用0.01g天平称量配制培养基所需的各种药品，先按培养基配方计算出各成分的用量．然后进行准确称量。

溶解：将称好的药品置于一烧杯中，先加入少量水(根据实验需要可用自来水或蒸馏水)，用玻璃棒搅动，加热溶解。

定容：待全部药品溶解后，倒入一量筒中，加水至所需体积。如某种药品用量太少时，可预先配成较浓溶液，然后按比例吸取一定体积溶液，加入至培养基中。

调pH：一般用pH试纸测定培养基的pH。用剪刀剪出一小段pH试纸，然后用镊子夹取此段pH试纸，在培养基中蘸一下，观看其pH范围，如培养基偏酸或偏碱时，可用1mol/LNaoH或1mol/LHCl溶液进行调节。调节pH时，应逐滴加入NaOH或HCI溶液，防止局部过酸或过碱，破坏培养基中成分。边加边搅拌，并不时用pH试纸测试，直至达到所需pH为止。

过滤：用滤纸或多层纱布过滤培养基。一般无特殊要求时，此步可省去。

3.培养基的灭菌

培养基经分装包扎后，应立即按配制方法规定的灭菌条件进行进行高压蒸汽灭菌。灭菌后的培养基，一般需进行无菌检查。最好取出1~2管(瓶)，置于37℃温箱中培养1~2天，确定无