免疫学检验技术—酶免疫技术.pptx

;;目录;用荧光素、放射性同位素、酶、铁蛋白、胶体金及化学(或生物)发光剂等作为追踪物（或称示踪物），标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应；

并借助于荧光显微镜，射线测量仪，酶标检测仪，电子显微镜和发光免疫测定仪等精密仪器，对实验结果直接镜检观察或进行自动化测定；

可以在细胞、亚细胞、超微结构及分子水平上，对抗原抗体反应进行定性、定量和定位研究；;免疫标记技术的发展历程;;特点;;;第一节酶标志物的制备;1.辣根过氧化物酶（HRP）;HRP的底物;OPD反应后显橙黄色，加酸终止反应后呈棕黄色，测定波长492nm。不稳定，致癌性。;2.碱性磷酸酶

;二、制备酶标记抗体(抗原）的方法;三、酶标记物的纯化与鉴定;四、固相载体;（二）固相载体的种类;第二节酶联免疫吸附试验;二、ELISA的方法类型;;如果血清标本中含有类风湿因子（RF），则可出现假阳性反应。因为类风湿因子是一种抗变性IgG的自身抗体，它可同时与固相抗体和酶标抗体的Fc段发生结合，导致假阳性的出现。;（二）双位点一步法;;（三）间接法;（四）竞争法;酶标抗原;2.竞争法检测抗体;;（2）竞争法检测HBeAb：

先将HBeAb包被在固相载体上，形成固相抗体，同时加入待测样本和中和抗原HBeAg，待测样本的抗体将与固相抗体竞争与中和抗原HBeAg结合。加入酶标的特异抗体，再加入酶底物，则显色的强弱与待测样本中的相应抗体的含量成反比。;;(五)捕获法;;在应用此法时需注意RF(IgM类)及其他非特异IgM的干扰。RF(IgM类)既能与固相载体上的IgM第二抗体结合，又能与随后加入的酶标抗体结合，从而导致假阳性结果。;;;三、ELISA的关键技术;（二）最适工作浓度的选择;（三）测定方法的标准化;四、评价与应用;（二）应用;第三节其他酶免疫技术;酶扩大免疫分析技术示意图;克隆酶供体免疫分析示意图;液相酶免疫技术是非均相酶免疫技术的方法类型之一，因抗原抗体反应在液相中进行而得名。其依据样品抗原加样顺序和温育反应时相不同可分为平衡法和非平衡法两种类型。;三、斑点酶免疫吸附试验;四、斑点酶免疫渗滤试验;五、免疫印迹试验;（一）生物素和亲和素的??点;常用的方法有三种：BA法

BAB法

ABC法

;小结;;;目录;用荧光素、放射性同位素、酶、铁蛋白、胶体金及化学(或生物)发光剂等作为追踪物（或称示踪物），标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应；

并借助于荧光显微镜，射线测量仪，酶标检测仪，电子显微镜和发光免疫测定仪等精密仪器，对实验结果直接镜检观察或进行自动化测定；

可以在细胞、亚细胞、超微结构及分子水平上，对抗原抗体反应进行定性、定量和定位研究；;免疫标记技术的发展历程;;特点;;;;;目录;第一节酶标志物的制备;1.辣根过氧化物酶（HRP）;HRP的底物;OPD反应后显橙黄色，加酸终止反应后呈棕黄色，测定波长492nm。不稳定，致癌性。;2.碱性磷酸酶

;二、制备酶标记抗体(抗原）的方法;三、酶标记物的纯化与鉴定;四、固相载体;（二）固相载体的种类;;;目录;ELISA属于免疫标记技术的一种，1971年由荷兰和瑞典的学者提出，由于其操作过程简单易行并可以定量，从而使其在生物医学领域中得到了广泛的应用。;ELISA方法操作简单，测定模式多，应用方便，亦可自动化，但测定线性范围较窄，批间变异相对较大，手工操作受影响因素较多，国内多用在抗原和抗体的定性检测，但也可用于定量检测。;酶联免疫吸附试验测定法和其他免疫方法一样，都是以抗体和抗原的特异性结合为基础，其差别在于酶联免疫方法以酶或者辅酶作为标记物来标记抗原或抗体，用酶促反应的放大作用来显示初级免疫学反应。

其最大的特点是利用聚苯乙烯微量反应板（或球）吸附抗原或者抗体使之固相化，在其中进行免疫反应和酶促反应。

;一、ELISA的检测原理;待测样品（含待测物）与酶标抗原或抗体反应;二、ELISA的方法类型;;如果血清标本中含有类风湿因子（RF），则可出现假阳性反应。因为类风湿因子是一种抗变性IgG的自身抗体，它可同时与固相抗体和酶标抗体的Fc段发生结合，导致假阳性的出现。;（二）双位点一步法;;（三）间接法;;（四）竞争法;酶标抗原;2.竞争法检测抗体;;（2）竞争法检测HBeAb：

先将HBeAb包被在固相载体上，形成固相抗体，同时加入待测样本和中和抗原HBeAg，待测样本的抗体将与固相抗体竞争与中和抗原HBe