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土壤过氧化氢酶的测定

（高锰酸钾滴定法）

1范围

本标准规定了土壤过氧化氢酶的测定方法（高锰酸钾滴定法）。

本标准适用于各类土壤过氧化氢酶的测定（高锰酸钾滴定法）。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的应用文件，仅注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T601化学试剂标准滴定溶液的制备

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

NY/T1121.1土壤检测第一部分：土壤样品的采集、处理和贮存

3原理

在4℃条件下，土壤过氧化氢酶酶促分解过氧化氢，用高锰酸钾标准溶液滴定反应剩余过氧化氢，所消耗的高锰酸钾标准溶液体积数来表示过氧化氢酶的活性。

4试剂和溶液

除非另有说明外，本方法均使用符合国家标准的分析纯试剂，分析用水为GB/T6682规定的三级水。

4.1甲苯（C7H8）。

4.2浓硫酸（H2SO4）。

4.3过氧化氢（H2O2）。

4.4高锰酸钾（K2MnO4）。

4.5硫酸溶液（0.2mol/L）

准确移取5.43mL浓硫酸，缓缓注入400mL水中，冷却后用水定容至500mL。置于4℃冰箱贮存。

4.6高锰酸钾标准溶液c（1/5K2MnO4）=0.1mol/L

称取3.3g（精确至0.0001g）高锰酸钾，溶于1050mL水中，缓缓煮沸15min，冷却，于暗处放置两周，过滤。贮存于棕色瓶中，并按照GB/T601对其进行标定。

4.7过氧化氢水溶液（3%）

准确量取30%过氧化氢溶液25mL，用水定容至250mL，配成3%过氧化氢水溶液，置

于4℃冰箱贮存，临用时用0.1mol/L高锰酸钾标准溶液（4.6）标定。准确吸取1.00mL3%过氧化氢溶液于50mL三角瓶中，加入5mL水，5mL0.2mol/L的硫酸溶液（4.5），用0.1mol/L的高锰酸钾标准溶液（4.6）标定，所消耗的体积数为16.51mL。

备注：由于不同批次的过氧化氢浓度存在差异，因此需要每次滴定前标定，若消耗高锰酸钾标准溶液（4.6）的体积大于或小于16.51mL时，说明过氧化氢的实际浓度大于或小于3%，这种情况就要重新配制过氧化氢溶液重新标定，直到过氧化氢实际浓度等于3%时才能使用。

5仪器设备

5.1电子天平:感量0.0001g。

5.2冰箱（4℃)。

5.3酸式滴定管。

6操作步骤

分别称取5g（精确至0.0001g）土壤（如含量高可适当减少称样量）样品于具塞三角瓶中（用不加土样的作空白对照），加入0.5mL甲苯（4.1），摇匀，于4℃冰箱中放置30min。取出，立刻加入25mL4℃冰箱贮存的3%过氧化氢水溶液（4.7），充分混匀后，再置于4℃冰箱中放置1h。取出，迅速加入25mL贮存于4℃冰箱的0.2mol/L硫酸溶液（4.5），摇匀后过滤。准确吸取1.00mL滤液于50mL三角瓶中，加入5mL水和5mL0.2mol/L硫酸溶液（4.5），用0.1mol/L高锰酸钾标准溶液（4.6）滴定，滴定至紫色褪去出现浅粉色为终点。根据空白和样品的滴定差，求出相当于分解过氧化氢的量所消耗的高锰酸钾标准溶液（4.6）。

7结果计算

过氧化氢酶活性以1h，1g风干土壤所消耗0.1mol/L

表示，按式（1）计算：

X=(V0一V)Tmf

高锰酸钾标准溶液的体积数来

............................(1)

高锰酸钾滴定度的矫正值，按式（2）计算：

T=............................(2)

式中：

X过氧化氢酶活性，单位为毫升每克每小时（mL/g·h）；

V0空白所消耗的高锰酸钾标准溶液的滴定体积，单位为毫升（mL）；V样品所消耗的高锰酸钾标准溶液的滴定体积，单位为毫升（mL）；T高锰酸钾滴定度的矫正值；

m表示新鲜土壤质量，单位为克（g）；

f表示风干土壤占新鲜土壤的比例。

结果保留三位有效数字。

8精密度

在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。