备课素材：动物细胞传代步骤及生长 高二下学期生物人教版选择性必修3.docxVIP

动物细胞传代步骤及生长

先看一道试题：

某动物细胞培养过程中，细胞贴壁生长至接触抑制时，需分装培养，实验操作过程如图。

下列叙述错误的是（????）

A．①加消化液的目的是使细胞与瓶壁分离

B．②加培养液的目的是促进细胞增殖

C．③分装时需调整到合适的细胞密度

D．整个过程需要在无菌、无毒条件下进行

解析：①加消化液的目的是使细胞与瓶壁分离，形成细胞悬液，A正确；据题意，需分装培养，②加培养液目的不应是为细胞增殖，而是洗去残留的消化酶，终止消化酶的消化作用，并对细胞加以稀释，B错误；③分装时需调整到合适的细胞密度，因为若密度过大细胞直接仍存在接触抑制，C正确；动物细胞培养需要无菌无毒环境，因此整个过程需要在无菌、无毒条件下进行，D正确。故答案为B。

这是2024年浙江高考试题，试题考了动物细胞培养过程中，细胞的生长。

传代培养动物细胞的处理方法

1.动物细胞培养的一般过程

?取材和分散?：首先，从动物体内取出组织块，将其剪碎成1mm3大小。使用胰蛋白酶等消化液将组织块分散成单个细胞。常用的消化液有胰蛋白酶，适用于细胞间质较少的软组织?。

?原代培养?：将分散后的细胞悬浮在培养液中，转入培养瓶或培养板中进行原代培养。原代培养是指将取得的细胞首次培养在新的环境中，细胞需要一段时间适应和生长?。

?传代培养?：当细胞贴满瓶壁后，使用胰蛋白酶等处理将细胞分散为单个细胞，然后分瓶转入新的培养液中进行传代培养。传代的原因包括细胞密度过大、有害代谢物积累、营养物质缺乏和接触抑制等?。

?注意事项?：在整个过程中，必须严格遵守无菌操作，使用经过严格消毒的器皿和试剂。观察细胞的生长状态，确保细胞在适宜的环境中生长。传代时要注意细胞的密度和生长状态，避免细胞过度密集或营养不良?。

2.三类动物细胞传代培养的?具体操作步骤?

（1）贴壁生长细胞传代

先吸去或倾倒旧培养液，使用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次，尽量洗去残余血清。根据细胞贴壁的牢固程度，加入适当浓度的消化液使贴壁的细胞游离。加入蛋白酶抑制剂或者血清培养液终止消化。离心，弃上清液及混含于其中的胰酶等。换入新鲜培养液，重新悬浮细胞，计数并调整细胞密度，根据实验要求按一定比率分别接种到新的培养容器中继续培养。

（2）半悬浮生长细胞传代

此类细胞存在贴壁生长现象，但贴壁不牢，可直接吹打方法使细胞从瓶壁脱落下来，进行传代，但直接吹打会造成一些细胞损伤，亦可采用消化法传代。

（3）悬浮生长细胞传代

悬浮细胞多采用离心法传代。将培养物转移到离心管内，以1000r/min离心后弃去上清液，沉淀细胞加新培养液后再混匀传代，即待悬浮细胞慢慢沉淀在瓶壁后，将上清液去除1/3-2/3，然后用吸管直接吹打形成悬浮细胞再传代。

例、已知某动物细胞培养过程中会发生细胞贴壁现象。下列相关叙述正确的是（????）

A.对贴壁细胞进行收集时，可直接采用离心法

B.悬浮培养的细胞会因细胞密度大等因素使细胞分裂受阻

C.动物细胞培养一般采用固体培养基，并维持一定的气体环境

D.只有原代培养到传代培养过程需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理

解析：贴壁细胞需先用胰蛋白酶等处理，分散成单个细胞后，再进行离心收集，A错误；悬浮培养的细胞会因细胞密度过大、有害代谢物积累和培养液中营养物质缺乏等因素而分裂受阻，B正确；动物细胞培养一般采用液体培养基，并维持一定的气体环境（5%CO2和95%的空气），C错误；该动物细胞有贴壁生长和接触抑制现象，每一次传代培养均需加入胰蛋白酶或胶原蛋白酶分散成单个细胞，D错误。故答案为B。