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食品补充检验方法

BJS202307

蜂蜜中二羟基丙酮、甘露糖和蜜二糖的测定

2023-06-13发布

国家市场监督管理总局发布

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BJS202307

蜂蜜中二羟基丙酮、甘露糖和蜜二糖的测定

1范围

本方法规定了蜂蜜中二羟基丙酮、甘露糖和蜜二糖的气相色谱-质谱测定方法。

本方法适用于预包装油菜蜂蜜、洋槐蜂蜜、荆条蜂蜜、椴树蜂蜜和枣花蜂蜜,不适用于蜂蜜制品。

2原理

蜂蜜试样用乙醇水溶液溶解并减压干燥后,先加入盐酸羟胺吡啶溶液进行肟化反应,以减少异构体衍生化产物的生成,再加入N,O-双(三甲基硅基)-三氟乙酰胺进行硅烷化反应,以完成整个衍生化过程。离心后,取上清液采用气相色谱-质谱法检测。以甲基聚硅氧烷为固定相的石英毛细管柱进行色谱分离,以选择性离子监测模式(SIM)进行质谱扫描,以保留时间和定性离子的丰度比定性,以外标法定量。

3试剂和材料

除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。

3.1试剂

3.1.1无水乙醇(C2H6O)。

3.1.2盐酸羟胺(ClH4ON)。

3.1.3吡啶(C5H5N)。

3.1.4N,O-双(三甲基硅基)-三氟乙酰胺(C8H18F3NOSi2,CAS号:25561-30-2)。

3.2试剂配制

3.2.1乙醇水溶液:将无水乙醇(3.1.1)和水按7:3的体积比混合均匀。

3.2.2盐酸羟胺吡啶溶液(25g/L):称取25g盐酸羟胺(3.1.2),溶于吡啶(3.1.3)并定容至1L。

3.3标准物质

二羟基丙酮、甘露糖和蜜二糖标准物质基本信息见表1,纯度均≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

表1标准物质基本信息

中文名称

英文名称

CAS号

分子式

相对分子质量

二羟基丙酮

Dihydroxyacetone

96-26-4

C3H6O3

90.08

甘露糖

Mannose

3458-28-4

C6H12O6

180.16

蜜二糖

Melibiose

585-99-9

C12H22O11

342.30

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3.4标准溶液配制

3.4.1标准工作溶液的配制

分别准确称取一定量的二羟基丙酮、甘露糖和蜜二糖标准物质,溶解于适量水中,配制成1Mg/ML的二羟基丙酮标准工作溶液,10Mg/ML的甘露糖标准工作溶液,10Mg/ML的蜜二糖标准工作溶液,现配现用。

3.4.2标准曲线的配制

称取5份空白蜂蜜样品各5g(精确至0.01g)于50ML容量瓶中,分别添加二羟基丙酮标准工作溶液25μL、50μL、100μL、250μL、500μL;甘露糖标准工作溶液50μL、100μL、250μL、500μL、1000μL;蜜二糖标准工作溶液25μL、50μL、100μL、250μL、500μL。再加入适量乙醇水溶液(3.2.1),振摇至样品完全溶解,然后用乙醇水溶液(3.2.1)定容至刻度,使二羟基丙酮的浓度分别为0.5μg/ML、1μg/ML、2μg/ML、5μg/ML、10μg/ML,甘露糖的浓度分别为10μg/ML、20μg/ML、50μg/ML、100μg/ML、200μg/ML,蜜二糖的浓度分别为5μg/ML、10μg/ML、20μg/ML、50μg/ML、100μg/ML。分别移取0.2ML上述溶液真空干燥、衍生化后进样分析。

注:应选择未检出二羟基丙酮、甘露糖和蜜二糖的油菜蜂蜜、洋槐蜂蜜或者荆条蜂蜜作为空白蜂蜜样品。

4仪器和设备

4.1气相色谱-质谱联用仪:配有电子轰击电离源(EI源)。

4.2天平:感量分别为0.01g和0.1Mg。

4.3恒温干燥箱。

4.4真空干燥箱:真空度不低于0.08Mpa。

4.5高速离心机:最高转速不低于15000r/Min。

4.6旋涡仪。

5分析步骤

5.1样品的制备

对无结晶的蜂蜜样品,将其搅拌均匀。对有结晶的蜂蜜样品,在密闭情况下,置于不超过60℃的水浴中温热,振荡,待样品全部融化后搅匀,冷却至室温。