抗生素生产工艺系列.ppt

半合成抗生素的目的：*01增强抗菌力；02扩大抗菌谱；03对耐药菌有效；04便于口服；05降低毒副作用或提高生物有效性。二、生物合成法生产抗生素的工艺过程*抗生素总的生产工艺过程菌种孢子制备种子制备发酵精制过程成品检验提取过程成品包装发酵液预处理及过滤出厂检验微生物合成抗生素上游：菌种保存、选育、孢子及种子制备发酵——适宜的培养基碳源氮源无机盐（微量元素）前体下游：提取预处理过滤进一步提取结晶干燥纯品成品:制剂工作1、产生菌种*复壮：一般生产用菌株经多次移植往往会发生变异而退化，故必须经常进行菌种选育和纯化以提高其生产能力。菌种：来源于自然界，得到能产生抗生素的微生物，经分离、选育和纯化后的物质；保藏：冷冻干燥法制备后，以超低温，即在液氮冰箱(-190℃~-196℃)内保藏；2、孢子制备*1条件：生产用的菌株须经纯化和生产能力的检验，若符合规定，才能用来制备种子；2孢子制备：将保藏的处于休眠状态的孢子，在严格的无菌条件下，将其接种到经灭菌过的固体斜面培养基上，在一定温度下培养5-7日或7日以上，这样培养出来的孢子数量还是有限的；3扩大培养：必要时可进一步用扁瓶在固体培养基(如小米、大米、玉米粒或麸皮)上扩大培养。3、种子制备*231目的：使孢子发芽、繁殖以获得足够数量的菌丝，并接种到发酵罐中；方法：可用摇瓶培养后再接入种子罐进逐级扩大培养或直接将孢子接入种子罐逐级放大培养。扩大培养：级数通常为二级。种子扩培工艺流程*砂土孢子2.冷冻干燥孢子3.斜面孢子4.药瓶液体培养茄子瓶斜面培养6.固体培养基培养8.种子罐培养9.发酵罐4、培养基的配制*在抗生素发酵生产中，由于各菌种的生理生化特性不一样，采用的工艺不同，所需的培养基组成亦各异。01即使同一菌种，在种子培养阶段和不同发酵时期，其营养要求也不完全一样。02培养基主要成分包括碳源、氮源、无机盐类(包括微量元素)和前体等。03(1)碳源*主要用以供给菌种生命活动所需的能量，构成菌体细胞及代谢产物。有的碳源还参与抗生素的生物合成，是培养基中主要组成之一；常用碳源包括淀粉、葡萄糖和油脂类。(2)氮源*有机氮源：黄豆饼粉、花生饼粉、棉籽饼粉、玉米浆、蛋白胨、尿素、酵母粉、鱼粉、蚕蛹粉和菌丝体等。无机氮源：氨水(氨水既作为氮源，也用以调节pH)，硫酸铵、硝酸盐和磷酸氢二氨等。主要用以构成菌体细胞物质(包括氨基酸、蛋白质、核酸)和含氮代谢物，亦包括用以生物合成含氮抗生素。(3)无机盐和微量元素*抗生素产生菌和其他微生物一样，在生长、繁殖和产生生物产品的过程中，需要某些无机盐类和微量元素。如硫、磷、镁、铁、钾、钠、锌、铜、钴、锰等，其浓度与菌种的生理活性有一定影响。(4)前体(precursor)*定义：在抗生素生物合成中，菌体利用它以构成抗生素分子中的一部分而其本身又没有显著改变的物质。01前体除直接参与抗生素生物合成外，在一定条件下还控制菌体合成抗生素的方向并增加抗生素的产量。02前体的加入量应当适度。03(5)培养基的质量*A在必要时作摇瓶试验以控制其质量；B培养基的储存条件对培养基质量的影响；C培养基灭菌过程中温度过高、受热时间过长亦能引起培养基成分的降解或变质；D培养基初始pH亦要严格按规程执行。5、发酵*定义：利用为生物体的代谢作用，并借助于代谢过程的控制来获得产品的过程。01目的：使微生物大量分泌抗生素。025、发酵*灭菌：在发酵开始前，有关设备和培养基也必须先经过灭菌后再接入种子。01接种：将活化的菌种转移到无菌的培养基，接种量一般为10%或10%以上。02发酵控制*发酵时间：视抗生素品种和发酵工艺而定。溶氧：在整个发酵过程中，需不断通无菌空气和搅拌，以维持一定罐压或溶氧。控制灌温：在罐的夹层或蛇管中需通冷却水以维持一定罐温。消泡：加泡沫剂以控制泡沫，必要时还加入酸、碱以调节发酵液的pH。3214★发酵控制*对有的抗生素在发酵过程中还需加入葡萄糖、铵盐或前体，以促进抗生素的产生。检测指标：定时取样进行生化分析、镜检和无菌试验。分析或控制的参数有菌丝形态和浓度、残糖量、氨基氮、抗生素含量、溶解氧、pH、通气量、搅拌转速和液面控制等。6、发酵液的过滤和预处理*1目的：分离菌丝、去除杂质；2多