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白芍炭对淀粉样变肝损伤的干预作用

摘要

目的：本研究通过淀粉样变性诱导的肝细胞损伤模型，筛选出对肝细

胞损伤具有最佳干预效果的白芍炮制品。利用UHPLC-OE-MS和

HPLC-QTRAP-MS/MS技术分析鉴定目标炮制品的化学成分，并结合网络

药理学技术，探讨该炮制品对淀粉样变性导致的肝损伤的潜在作用机制。

此外，通过构建体内小鼠淀粉样变肝损伤模型并结合体外实验，探讨相关

作用机制，为治疗肝脏淀粉样变性疾病提供潜在的候选药物及治疗策略。

方法：

1.利用NCTC1469肝细胞构建淀粉样变溶菌酶（LYSO-6）诱导的肝

细胞损伤模型，并利用细胞活性检测法（CCK-8）和酶联免疫吸附法

（ELISA）筛选对LYSO-6诱导的肝细胞损伤干预作用最佳的白芍炮制品。

2.建立UHPLC-OE-MS方法对白芍炭50%乙醇提取物进行化学成分

的表征和鉴定。

3.基于成分的表征结果，通过网络药理学探索白芍炭提取物干预肝

淀粉样变损伤的作用机制，利用HPLC-QTRAP-MS/MS技术测定白芍炭6

种核心活性成分的含量。

4.动物实验选用苏木精-伊红染色法（HE）、刚果红（CR）染色法

观察肝脏的病理变化；利用ELISA试验测定血清淀粉样蛋白A（SAA）

和肝组织血清淀粉样蛋白P（SAP），载脂蛋白E（APO-E）的表达情况；

微量酶标法测定肝脏生化指标天冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基

转移酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）的表达量和肝脏Ca2+-ATP酶的活

力；免疫组化染色法（IHC）观察F4/80、SAA、白介素-6（IL-6）、肿瘤

坏死因子-α（TNF-α）、白介素-8（IL-8）蛋白的表达情况。

5.体外细胞实验选用微量酶标法测定细胞Ca2+-ATP酶的活力；荧光

探针法检测细胞内钙离子的表达情况；ELISA试验测定细胞IL-6、

TNF-α、IL-8、白介素-2（IL-2）的表达水平。

6.采用紫外-可见光谱法（UV-Vis）和圆二色光谱法（CirularDichrosin，

CD）检测白芍炭提取物对LYSO-6二级结构的影响。

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结果：

1.不同白芍炮制品对淀粉样变肝细胞损伤的干预作用

-5

浓度为1×10mol/L的LYSO-6刺激NCTC1469细胞24h成功构建

了LYSO-6诱导的肝细胞损伤模型。CCK-8和ELISA结果显示LYSO-6

显著降低了肝细胞的活力并增加了SAA的表达量。基于此种细胞模型，

我们在生白芍、炒白芍、麸炒白芍、醋白芍、白芍炭五种不同白芍炮制品

中筛选并确定了28μg/mL的白芍炭对细胞发挥最佳保护作用，50%乙醇

为最佳药效的提取溶剂，基于上述条件确定白芍炭50%乙醇提取物为发挥

保护作用的受试物。

2.液质联用技术结合网络药理学分析白芍炭的成分及其在肝淀粉样

变性中的作用。

2.1白芍炭成分表征

通过UHPLC-OE-MS技术进行白芍炭50%乙醇提取物成分表征，结

合样品的色谱，质谱信息，在正负离子的模式下，最终分析出白芍炭成分

131种，包括酚酸类37种、萜类22种、脂肪酸及其衍生物类21种、黄

酮类21种、糖类12种、香豆素类9种、苯丙素类8种、其他类1种。受

试物中70%以上的成分种类为酚酸类、萜类、脂肪酸及其衍生物类和黄酮

类，其中酚酸类约占种类的28%。

2.2白芍炭对于肝淀粉变性干预作用的机制分析

将分析出的白芍炭的131种成分导入TCMSP数据库，通过口服吸收

利用度（O