1.2.1微生物的培养技术 课件 高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

请同学们自主阅读教材P11-13，完成优化学案P10-111.相关概念：培养物？纯培养物？纯培养？（P11）2.什么是菌落？单菌落？（P12）3.获得单菌落的方法？（P12）4.酵母菌的纯培养的基本步骤？（注意倒平板和接种的具体操作）任务三：

纯培养物培养物纯培养在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含有特定种类微生物的群体。获得纯培养物的过程。由单一个体繁殖所获得的微生物群体。配制培养基灭菌倒平板接种和分离培养制备培养基三、微生物纯培养

酵母菌的纯培养分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。采用平板划线法和稀释涂布平板法能将单个微生物分散在固体培养基上，之后经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。下面，我们尝试在马铃薯琼脂培养基上进行酵母菌的纯培养。目的要求1.学会配制培养酵母菌的培养基并倒平板。2.学会进行无菌操作。3.尝试通过平板划线操作来获得纯化的酵母菌菌落。材料用具酵母菌培养液、马铃薯、葡萄糖(或蔗糖)、琼脂、蒸馏水、天平、小刀、纱布、烧杯、锥形瓶、棉塞、牛皮纸(或报纸)、皮筋、培养皿、接种环、酒精灯、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、干热灭菌箱和恒温培养箱等。

实验：酵母菌的纯培养接种和分离培养酵母菌制备培养基1.制备培养基配制培养基灭菌倒平板方法步骤

（1）配制培养基1、制备培养基(四).实验步骤称取去皮的马铃薯200g切成小块加水1000mL，加热煮沸至马铃薯软烂。用纱布过滤滤液中加入20g葡萄糖，15~20g琼脂。用蒸馏水定容至1000mL得到滤液三、微生物纯培养

（2）灭菌1、制备培养基(四).实验步骤将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞。包上牛皮纸，并用皮筋勒紧。压力100kPa、温度为121℃的条件下，灭菌15~30min。取5~8套培养皿培养皿叠成一束用几层牛皮纸包紧放入干热灭菌箱内，160~170℃灭菌2h。三、微生物纯培养

培养基冷却到50℃左右，在酒精灯火焰附近倒平板。1拔出锥形瓶的棉塞。2将瓶口迅速通过火焰。3用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基倒入培养皿（10～20mL），立即盖上皿盖。4等待培养基冷却凝固后，将培养皿倒过来放置。1.防止培养基水分过快蒸发。2.防止皿盖上冷凝水滴落，造成污染。通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。不能完全打开，以免杂菌污染培养基。（3）倒平板：1、制备培养基可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。三、微生物纯培养

倒平板

①培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？②在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？③平板冷凝后，为什么要将平板倒置？④怎么确定所倒平板未被杂菌污染？可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手时即可。最好不要用这个平板培养微生物。防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠。将平板倒置，既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，又可以避免培养基中的水分过快地挥发。将所倒平板放入37℃的恒温箱中培养，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。

(四).方法步骤通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。经过数次划线后培养，可以分离到单菌落。连续划线法分区划线法2、接种和分离酵母菌平板划线法分离的方法：三、微生物纯培养

平板划线法单个细胞微生物群单个菌落连续划线稀释分散生长繁殖①灼烧接种环，直至接种环金属丝烧红。⑤试管口通过火焰，并塞上棉塞。②在火焰旁冷却接种环，拔出酵母菌培养液试管的棉塞。③试管口通过火焰。④在火焰附近用接种环蘸取一环菌液。⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线。⑥将皿盖打开一条缝隙，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划3-5条平行线，盖上皿盖。三、微生物纯培养

12345【平板划线法注意事项】1.接种环只蘸一次菌液，但要在培养基不同位置连续划线多次。2.划线不要将最后一次的划线与第一次的划线相连。3.每次划线前灼烧接种环进行灭菌；划线操作结束后，仍需灼烧接种环。将聚集的菌种进行稀释，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。思考：为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环的原因。分区划线法（1）取菌种前灼烧：（2）每次划线前灼烧：（3）接种结束后灼烧：灭菌，杀死接种环上原有微生物。杀死