3.1重组DNA技术的基本工具课件-高二下学期生物人教版选择性必修3(2).pptx

第3章基因工程人教版·选择性必修3授课人：孙海燕

大肠杆菌人胰岛素产生（能产生人胰岛素版）

水母的绿色荧光蛋白基因荧光鼠抗虫棉五彩玉米转基因大豆

指按照人们的愿望,进行严格的设计并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫作DNA重组技术。【归纳定义】工程别名：操作对象：操作水平：工程实质：工程意义：什么是基因工程？DNA重组技术基因DNA分子水平基因重组定向改造生物性状；克服远缘杂交不亲和障碍

1.基因是控制生物性状的结构与功能单位复制基因工程的理论基础2.遗传信息传递都遵循中心法则3.所有生物几乎共用一套遗传密码

第1节重组DNA技术的基本工具

从社会中来番木瓜容易受番木瓜环斑病毒的侵袭。当番木瓜被这种病毒感染后，产量会大大下降。科学家通过精心设计，用“分子工具”培育出了转基因番木瓜，它可以抵御番木瓜环斑病毒。DNA双螺旋的直径只有2nm,对如此微小的分子进行操作，是一项非常精细的工作，更需要专门的“分子工具”。转基因番木瓜（左）与非转基因番木瓜（右）

分子运输车分子手术刀分子缝合针准确切割DNA分子将体外重组好的DNA分子导入受体细胞将DNA片段再连接起来限制性内切核酸酶分子进入细胞的载体DNA连接酶

1.来源：主要来自原核生物一、限制性内切核酸酶——分子手术刀旁栏思考?根据你所掌握的知识你能推测限制酶存在于原核生物中的作用是什么？主要起到切割外源DNA使之失效，从而达到保护自身的目的。为什么限制性内切酶不切割细菌本身的DNA分子？细菌DNA分子中不具备这种限制酶的识别序列，或者DNA分子被修饰（如甲基化等），使限制酶不能将其切开2.种类：数千种（限制酶不是一种酶，而是一类酶）

（1）能够专一性识别双链DNA分子的特定核苷酸序列；一般由6个核苷酸组成，也有少数限制酶的识别序列由4个、8个或其他数量的核苷酸组成。（2）使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开。EcoRI限制酶5′GAATTC3′一、限制性内切核酸酶——分子手术刀3.作用特点

EcoRⅠ……G-A-A-T-T-C…………C-T-T-A-A-G……SmaⅠ……C-C-C-G-G-G…………G-G-G-C-C-C……BamHⅠ……G-G-A-T-C-C…………C-C-T-A-G-G……TaqⅠ………T-C-G-A………………A-G-C-T………（3）呈现碱基互补对称，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的，称为回文序列。一、限制性内切核酸酶——分子手术刀

限制酶TGCCGTAA一、限制性内切核酸酶——分子手术刀53534.功能：能识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开。磷酸二酯键氢键

SmaI限制酶只能识别序列，切割和之间的切开，切割后产生。5.作用结果：AGTCATTCGATAGGATCATCATAT大肠杆菌(E.coli)的EcoRⅠ限制酶能特异性识别_________序列，并切割___和___之间的____________，切割后产生__________。GAATTCGA磷酸二酯键黏性末端EcoRI限制酶SmaI限制酶CCCGGGCG磷酸二酯键平末端CCCGGGGGGCCCGGGCCCCCCGGG限制酶限制酶一、限制性内切核酸酶——分子手术刀产生黏性末端或平末端

（1）连接粘性末端：二、DNA连接酶——分子缝合针E·coliDNA连接酶或T4DNA连接酶1.作用：将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。

两DNA片段要具有互补的黏性末端才能拼起来注意：DNA连接酶可连接双链DNA中的两条单链缺口，但不能连接单链DNA！二、DNA连接酶——分子缝合针

二、DNA连接酶——分子缝合针（2）连接平末端：T4DNA连接酶（效率低）（1）连接粘性末端：1.作用：将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。E·coliDNA连接酶或T4DNA连接酶

E·coliDNA连接酶与T4DNA连接酶比较类型来源E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶功能大肠杆菌T4噬菌体恢复磷酸二酯键只能连接黏性末端能连接黏性末端和平末端(效率