3.2.2基因表达载体的构建课件高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3.pptx

3.2.2基因表达载体的构建（核心步骤）授课人：罗桂莲授课时间：2025.3.21

学习目标生命观念：理解基因表达载体的结构与功能关系，形成“结构与功能相适应”的生物学基本观点；科学思维：能通过比较不同限制酶切割方案的优缺点（如单/双酶切），选择最优方法并论证依据；科学探究：通过模拟实验培养科学探究能力，掌握基因工程技术的核心方法；社会责任：关注我国水稻广谱抗病基因研究取得的进展，参与相关议题分析，培养一定的社会责任感。。基因表达载体的构建

【新华社】：我国水稻广谱抗病基因研究取得进展稻瘟病被称为“水稻癌症”，是一种毁灭性的真菌病害，全球水稻每年因稻瘟病造成的产量损失达数千万吨。“而目前水稻广谱抗病品种有限，防控措施仍然以药物防治为主。”李国田说，培育广谱抗病水稻品种，是实现作物病害绿色防控的有效措施。李国田研究团队历时10年通过对水稻类病斑突变体的研究，发现了磷脂代谢参与水稻抗病的作用机制，在理论突破的基础上，研究团队通过基因编辑技术研究发现了新型水稻广谱抗病基因RBL12。一生活情境一问题：通过PCR获得了足量的抗病基因RBL12，如何获得能产生RBL12抗病蛋白的水稻植株？

资料1：游离的“抗病基因RBL12”直接进入水稻细胞，一般会被分解，就算能表达，也不能随细胞分裂进行增殖，导致子代无该基因，若游离DNA能整合到染色体DNA上，或者能在细胞内独立稳定存在，能自我复制，则该游离DNA会随着细胞分裂传给子代。一基因表达载体的构建二思考讨论：1.通过PCR获得了足量的抗病基因RBL12，是否能直接将抗病基因RBL12直接导入水稻细胞呢？不能。游离的DNA进入受体细胞，一般会直接被分解，即使可以转录翻译成蛋白质，游离的DNA片段也无法随着细胞分裂而进行复制导致子代细胞中不再含有目的基因。因此，获取RBL12基因后，还需要借助载体将其导入并整合到水稻细胞的染色体中，才能使水稻植株获得抗病毒特性。(1)使目的基因在受体细胞中稳定存在，且可以遗传给下一代。(2)使目的基因能够在受体细胞中表达和发挥作用。2.构建基因表达载体的目的是什么？3.基因进入受体细胞的载体的结构？4.要使基因在水稻细胞中稳定存在并能够表达、发挥作用，载体还需要具备哪些结构？

02目的基因：能控制表达所需要的特殊性状必须插到和之间复制原点：DNA复制的起始位点终止子：本质：有特殊序列结构的片段位置：基因的。功能：终止。启动子：本质：有特殊序列结构的片段位置：基因的。功能：识别和结合的部位，驱动基因转录出。标记基因：作用为鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来DNA上游RNA聚合酶mRNA启动子终止子DNA下游转录一基因表达载体的构建二限制酶切割位点分析基因表达载体的结构任务一限制酶切割位点：插入目的基因

比较项目启动子终止子起始密码子终止密码子本质位置功能拓展：启动子、终止子、起始密码子、终止密码子对比DNA片段DNA片段mRNA上三个相邻的碱基mRNA上三个相邻的碱基目的基因上游目的基因下游mRNA首端mRNA尾端RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA使转录在所需要的地方停下来翻译的起始信号（编码氨基酸）AUG(甲硫氨酸）GUG（缬氨酸）翻译的结束信号（不编码氨基酸）（UAA、UGA、UAG)一基因表达载体的构建二

重组DNA分子限制酶获取目的基因连接酶基因表达载体构建模式图限制酶启动子限制酶切割位点终止子标记基因复制原点质粒目的基因限制酶切割位点同种限制酶或能产生相同末端的限制酶①用一定的切割载体，使其出现一个切口。②用限制酶或能产生的限制酶切割含有目的基因的DNA片段。③将切下的目的基因片段拼接到处，再加入适量，形成了一个重组DNA分子。限制酶同种相同末端载体的切口DNA连接酶一基因表达载体的构建二分析基因表达载体的构建过程任务二

一基因表达载体的构建二分析基因表达载体构建的方法任务三实践活动1：用一种限制酶完成广谱抗病基因RBL12表达载体的构建步骤1：请用限制酶①切割质粒，使其出现一个切口；步骤2：请用限制酶①切割切割含有广谱抗病基因RBL12的DNA片段；步骤3：将切下的广谱