分析化学-配体交换色谱.pptVIP

ChiralPharmaceuticalAnalysis－色譜儀的基本組成及配體交換色譜HPLC組成高壓輸液泵輸出壓力高：150～350×105Pa流量穩定、範圍寬，液缸容積小具有壓力平穩、脈衝小、密封性能好、耐腐蝕等特性並聯雙泵系統串聯雙泵系統梯度洗脫（GradientElution）進樣裝置進樣過程色譜柱柱接頭、柱管、濾片三部分組成柱接頭：兩端螺紋組件不銹鋼濾片：封堵柱填料柱管：耐受溶劑腐蝕氣動放大泵均勻緊密填充柱床HPLC色譜柱填料A.微表膜顆粒B.全多孔顆粒C.灌流顆粒矽膠填料機械強度好，高壓下不易變形填充床穩定柱效高反壓低柱壽命長耐受pH範圍窄pH2-8表面呈現酸性，分離鹼性化合物時拖尾多孔聚合物耐受pH範圍寬pH1-13在高pH分離鹼性化合物峰形好柱效低，柱床容易變形其他無機填料石墨碳氧化鋁氧化鋯填料類型C18矽烷鍵合相二甲基取代立體保護待分離組分，和載氣ABCD色譜分離原理試樣通過色譜柱時與填料之間發生相互作用，這種相互作用大小的差異使各組分互相分離而按先後次序從色譜柱後流出色譜過程示意圖保留時間和調整保留時間保留因數分離因數和相對保留譜帶展寬和柱效分離度峰不對稱性基本術語兩種成分的色譜分離示意圖為溶質在固定相中的分子數Ns和流動相中的分子數Nm之比令流動相的體積為Vm，固定相的體積為Vs，可以把與溶質在固定相和流動相間的分配係數（partitioncoefficient,K）相聯系可以由實驗測得保留因數（RetentionFactor,）a稱為分離因數，又稱為選擇性分離因數和相對保留混合物中兩組份的分離度R分離度分離度RSRs=0.75Rs=1.0，4%overlapRs=1.5，0.3%overlapBaselineResolvedR，k’，a之間的關係k’，a和n對分離度的影響色譜手性分離發展史1939，HendersonRule在乳糖上色譜分離外消旋樟腦衍生物1952，Dalgliesh提出氨基酸在紙色譜上光學分離三點作用假說1966，Gil-Au等用GC直接分離對映體1971，Davankov和Rogozhin引入手性配體交換色譜1972，Wulff和Sarhan製備出手性LC的酶模擬聚合物1973，Hesse和Hagel製備出手性拆分的纖維素三乙酸酯1973，Stewart和Dherty把瓊脂糖鍵合BSA用於手性拆分1974，Blaschke由光學活性單體合成出用手性LC的手性聚合物1975，Gram等用手性冠醚發展出主-客體色譜1979，Dirkle和House合成出第一個矽膠鍵合手性固定相1979，Okamoto等合成出手性LC的螺旋形聚合物1982，Allenmark等把瓊脂鍵合的BSA用於手性LC1983，Hermansson把矽膠鍵合的a1-酸性糖蛋白用於手性拆分1984，Armstrong和DeMond製備出矽膠鍵合環糊精固定相配體交換色譜1961年，Helfferich將離子交換與配體化學兩個領域結合，提出配體交換色譜概念。用於配位的金屬離子結合在聚合物載體上，待分離物通過與金屬離子的配位絡合作用或與金屬離子絡合的配體發生交換以實現分離。可以分離氨基酸及其衍生物，羥基酸等。1971，Davankov和Rogozhin將配體交換色譜成功應用於手性分離。配體交換色譜優勢配位絡合作用力很強，可以保證分離物質與固定相有較強的吸附作用配位絡合作用選擇性很強，不同分離物的配位能力差別較大，選擇性強具有很強的靈活性，通過不同金屬離子的選擇可以滿足不同分離物的分離。PrincipleofCLECHighequilibriumConstantLowequilibriumConstant由固體的手性配位體與過渡金屬離子組成手性固定相，外消旋混合物通過柱時，通過交換作用生成非對映混合配位體吸附配合物的過程稱為配體交換。TernarycoppercomplexeswithL-β-3-hydroxyphenylamineThemechanismofCLECChiralLigandExchangeChromatography(CLEC)Separatesenantiomersbyformationofdiaste