3.4基因工程及其技术第4课时课件-高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3.pptx

第1节基因工程及其技术

第4课时;

利用大肠杆菌生产人类胰岛素，我们已经获取了胰岛素基因，接下来该

如何使其在大肠杆菌中稳定存在呢?;

确保基因在受体细胞中稳定存在，并且遗传给下一代，使目的基因能

够有效表达。

思考1:若要干扰素基因在大肠杆菌中稳定存在，并能够表达和发挥作用，

载体还需要哪些结构?(阅读课本97页内容)

插入目的基因

表达载

终止子

复制原点-

标记基因;

思考2:各个元件有什么作用?(阅读课本97页内容)

a、复制原点DNA复制起点

b、目的基因能控制表达所需要的特殊性状X插入基因

位于基因的上游，是RNA聚合酶结合表达载体终止子

c、启动子位点，驱动基因转录出mRNA复制原点

抗生素基因

d、终止子位于基因的下游，终止转录

e、标记基因初步筛选接受了目的基因受体细胞;

2、过程：

限制酶切割位点

启动子、终止子;

5°ATTCATCsTCGAATC3酶切

3°5°

CTTAAGTAGCAGCTTAAG

◆缺点：酶切位点目的基因酶切位点

①质粒、目的基因会发生自身环化连接

②质粒与目的基因会发生反向连接;

补充2:双酶切体系总结：;

(1)不破坏目的基因：切点应位于目的基因两端，如图甲中可选择PstI,

而

不选择SmaI。

(2)保留标记基因、启动子、终止子、复制原点：所选择的限制酶尽量不

要破坏这些结构，如图乙中不选择SmaI。;

与终止子之间，不宜选择

PstI—

因其位于标记基因中，不宜选择;

即时训练

1.结合基因表达载体模式图分析以下问题：

(1)图中a、b、c分别代表什么结构?

a为启动子、b为终止子、c为复制原点。

(2)启动子和终止子与起始密码子和终止密码子是一

回事吗?

不是，启动子和终止子位于DNA上，是基因表达载体必需的部分。而起;;

目的基因插入

到马铃薯细胞

T-DNA

感染组织培养

抗病毒马铃薯;

小组讨论：农杆菌转化法中两次拼接、两次导入的目的：

(1)两次拼接：第一次拼接是将目的基因拼接到Ti质粒的T一DNA上；第二次拼接(???人工操作)指被插入目的基因的T一DNA拼接到受体细胞染色体的DNA上。

(2)两次导入：第一次导入是将含目的基因的重组Ti质粒导入农杆菌；第二次导入(非人工操作)是将含目的基因的T一DNA导入受体细胞。;

将含有目的基因的表达载体提纯;

①原核生物的特点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等。

②常用方法：Ca2+处理法(感受态细胞法);

A方法：DNA分子杂交

B过程：

①首先取出转基因生物的基因组DNA;

②将人工合成的目的基因的DNA片段用放射性同位素标记或荧光标记，以此做探针；(单链);

新知讲授

2.检测目的基因是否转录出了mRNA

①方法：分子杂交法

②过程：用上述探针和转基因生物的mRNA杂交，若出现杂交带，表明目的基因转录出了mRNA。;

0DNA

Bt毒素蛋白

质粒苏云金杆菌

插人目的基因

的染色体DNA

脱分化;

转基因生物;

1.研究表明，将豌豆早枯病毒(PEBV)的复制酶C端编码序列转入烟草后，转基因烟

草会对PEBV表现出抗性。下列说法正确的是

A.该过程需要用到限制酶和DNA聚合酶来构建基因表达载体

B.将豌豆早枯病毒(PEBV)的复制酶C端编码序列导入烟草细胞最常用的方法是Ca2+处理法

C.只要在转基因烟草细胞内检测出豌豆早枯病毒(PEBV)的复制酶C端编码序列就代表成功了

D.检测转基因生物DNA上是否插入了目的基因，可以用DNA分子杂交法;

2.在检测抗虫基因是否成功转入棉花基因组的方法中，不属于分子水平的是

A.观察害虫吃棉叶是否死亡

B.检测目的基因片段与DNA探针能否形成杂交带

C.检测目的基因转录形成的mRNA与DNA探针能否形成杂交带

D.检测目的基因表达产物蛋白质能否与特定抗体形成杂交带;

1.目的基

因的筛选

与获取