3.2.2基因工程的基本操作程序课件-高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

课前背诵1.基因工程的操作步骤2.筛选目的基因较为有效的方法3.目的基因的概念4.PCR技术是指？5.PCR反应体系中加入的组分？6.PCR每次循环分为几步？每步的温度及实质？7.引物的作用？引物结合在模板链的端，限制酶识别序列添加在引物的端，设计引物必须依据？8.构建基因表达载体的目的？9.基因表达载体的组成及各元件的作用

第2节基因工程的基本操作程序（第二科时）【本节聚焦】1、基因工程的基本操作程序主要包括哪几个步骤？2、基因工程操作的每一步涉及的技术和方法有哪些？第3章基因工程

将目的基因导入受体细胞的方法，因为受体细胞的不同而有所区别。导入方法：导入植物细胞导入动物细胞导入微生物细胞显微注射法Ca2+处理法三.将目的基因导入受体细胞花粉管通道法（我国科学家独创）农杆菌转化法（常用）

（1）常用方法：Ca2+处理原核细胞（常用大肠杆菌）增加细胞膜的通透性，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态（2）受体细胞：繁殖快，易培养，遗传物质少1.目的基因导入微生物细胞Ca2+感受态细胞吸收提示：通常没有生物活性，需要在体外进行再加工。因为原核生物没有内质网和高尔基体，无法对蛋白质进行进一步的加工。目的：优点：思考：原核生物作为受体细胞产生的真核生物的蛋白质在功能方面有什么不足？为什么？

（3）实例：利用转基因大肠杆菌生产药物加工成熟胰岛素

032.目的基因导入动物细胞（1）常用方法：（2）受体细胞:显微注射法受精卵①体积大，易操作。②易表现出全能性。（3)过程：构建基因表达载体并提纯利用显微注射将基因表达载体注入动物的受精卵中早期胚胎培养胚胎移植获得具有新性状的动物三.将目的基因导入受体细胞

703（1）花粉管通道法（我国科学家独创）②在植物受粉后的一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助花粉管通道进入胚囊。①用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注入子房中。目的基因目的基因适用生物：开花植物3.目的基因导入植物细胞三.将目的基因导入受体细胞

（2）农杆菌转化法转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。3.目的基因导入植物细胞农杆菌能在自然条件下侵染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有侵染能力。（可转移的DNA）关于农杆菌原理：农杆菌细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T-DNA转移到被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上。此处的“转化”与肺炎链球菌转化实验的“转化”实质是相同的，都是基因重组。过程：如果将目的基因插入Ti质粒的T-DNA中，通过农杆菌的转化作用，就可以使目的基因进入植物细胞转化的实质属于哪一种变异类型？

目的基因含有目的基因的重组Ti质粒T-DNATi质粒植物细胞含重组Ti质粒的农杆菌表现新性状的植株导入植物细胞转入农杆菌构建基因表达载体目的基因插入染色体DNA中植物组织培养（2）农杆菌转化法1.目的基因导入植物细胞①②③④⑤⑥讨论：1、请说出序号代表的含义？2、这一过程中共有几次DNA分子的拼接，几次导入细胞？2次，2次

农杆菌转化法中有两次拼接和两次导入:第一次拼接:将目的基因拼接到Ti质粒的T-DNA的中间部位；第二次拼接(非人工操作):指被插入目的基因的T-DNA被拼接到受体细胞的染色体DNA上。第一次导入:是将含目的基因的Ti质粒重新导入农杆菌；第二次导入(非人工操作):是指含目的基因的T-DNA导入受体细胞。

（2）农杆菌转化法1.目的基因导入植物细胞随着转化方法的突破，用农杆菌侵染水稻、玉米等多种单子叶植物也取得了成功。农杆菌转化法的实例：（1）可将新鲜的从叶片上取下的圆形小片与农杆菌共培养，然后筛选转化细胞，并再生成植株。具体转化方法：（2）可以将花序直接浸没在含有农杆菌的溶液中一段时间，然后培养植株并获得种子，再进行筛选、鉴定等。思考：1、方法1筛选出的转化细胞怎样再生成植株？2、以上两种方法的受体细胞有何不同？体细胞或受精卵

1．在基因工程技术中，将目的基因导入受体细胞的方法有许多种，下列叙述错误的是()A．受体细胞为大肠杆菌时，常用Ca2＋溶液处理B．农杆菌转化法主要用于双子叶植物和裸子植物C．利用显微注射法可将目的基因直接注入动物的受精卵中D．可采用花粉管通道法将含目的基因的DNA溶液直接注入子房C趁热打铁

思考：将基因表达载体导入受体细胞后，如何判断导入是否成功？即使导入成功，标记基因筛选呈阳性一定能确定转基因生物培育成功了吗？三、将目的基因导入受体细胞不一定，若导入的是空载体、载体-载体连接物，标记基因筛选也是呈阳性，因此仅凭标记基因有无，无法完全确定转基因生物是否培育成功。

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