小鼠精原细胞或精母细胞染色体畸变试验.docx

中华人民共和国国家标准

犌B15193．8—2014

食品安全国家标准

小鼠精原细胞或精母细胞染色体畸变试验

2014-12-24发布

2015-05-01实施

中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会

发布

Ⅰ

犌B15193．8—2014

前言

本标准代替GB15193．8—2003《小鼠舉丸染色体畸变试验》。

本标准与GB15193．8—2003相比，主要变化如下：

—标准名称修改为“食品安全国家标准小鼠精原细胞或精母细胞染色体畸变试验”；

—修改了范围；

—修改了术语和定义；

—修改了试验和目的原理；

—修改了实验动物要求；

—修改了试验步骤和观察指标；

—增加了试验报告内容要求。

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犌B15193．8—2014

食品安全国家标准

小鼠精原细胞或精母细胞染色体畸变试验

1范围

本标准规定了小鼠精原细胞或精母细胞染色体畸变试验的基本试验方法和技术要求。

本标准适用于评价受试物对小鼠生殖细胞染色体的损伤，根据具体情况选择精原细胞或精母细胞作为靶细胞。

2术语和定义

2．1精原细胞

雄性哺乳动物曲细精管上皮中能经过多次有丝分裂增殖并经减数分裂产生精母细胞的干细胞，为原始的雄性生殖细胞。具有体细胞相同的染色体数目。

2．2精母细胞

精原细胞经减数分裂产生的能最终分化成成熟精子的细胞，分为初级精母细胞和次级精母细胞。次级精母细胞染色体数减半成1n。

2．3染色体结构畸变

在细胞有丝分裂中期，通过显微镜可以直接观察到的染色体结构变化。结构畸变可分为染色体型畸变和染色单体型畸变。

2．4染色体型畸变

染色体结构损伤，表现为在两个染色单体的相同部位均出现断裂或断裂重接。

2．5染色单体型畸变

染色体结构损伤，表现为染色单体断裂或断裂重接。

2．6染色体数目畸变

染色体数目发生改变，不同于正常二倍体核型，包括整倍体和非整倍体。

3试验目的和原理

经口给予实验动物受试样品，一定时间后处死动物。观察舉丸精原细胞或精母细胞染色体畸变情况，以评价受试样品对雄性生殖细胞的致突变性。

动物处死前，用细胞分裂中期阻断剂处理，处死后取出两侧舉丸，经低渗、固定、软化及染色后制备精原细胞或精母细胞染色体标本，在显微镜下观察中期分裂相细胞，分析精原细胞或精母细胞染色体

畸变。

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GB15193．8—2014

4仪器和试剂

4．1实验室常用设备

实验室常用解剖器械、电子天平、冰箱、离心机等。

4．2试剂

4．2．10．1％秋水仙素

置于棕色瓶中，冰箱保存。

4．2．21％柠檬酸三钠

取1g柠檬酸三钠(分析纯)，加蒸馏水至100mL。

4．2．360％冰乙酸

取60mL冰乙酸(分析纯)，加蒸馏水至100mL。

4．2．4固定液

甲醇∶冰乙酸＝3∶1，现用现配。

4．2．5磷酸盐缓冲液(pH7．4)

磷酸氢二钠溶液(1／15mol／L)：磷酸氢二钠(Na2HPO4，分析纯)9．47g溶于1000mL蒸馏水中。磷酸二氢钾溶液(1／15mol／L)：磷酸二氢钾(KH2PO4，分析纯)9．07g溶于1000mL蒸馏水中。

取磷酸氢二钠溶液(1／15mol／L)80mL与磷酸二氢钾溶液(1／15mol／L)20mL混合，调pH至7．4。

4．2．6Giemsa染液

称取Giemsa染液3．8g，加入375mL甲醇(分析纯)研磨，待完全溶解后再加入125mL甘油。置37℃恒温箱保温48h振摇数次。过滤两周后用。

4．2．7Giemsa应用液

取1份Giemsa染液与9份磷酸盐缓冲液混合而成，现用现配。

5试验方法

5．1实验动物

5．1．1动物选择

实验动物的选择应符合GB14922．1和GB14922．2的有关规定。健康成年雄性小鼠，周龄为7周~12周，试验开始时动物体重的差异不应超过平均体重的±20％。动物应随机分组，每组至少包括5只可用于分析的动物。如试验设有几个采样的时间点，则要求每个采样时间点都至少有5只能用于分析

的动物。

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犌B15193．8—2014

5．1．2动物准备

试验前动物在实验动物房至少应进行3d~5d环境适应和检疫观察。

5．1．3动物饲养

实验动物饲养条件应符合GB14925