基底外侧杏仁核-前扣带回-下丘脑外侧区神经通路调控小鼠肠易激综合征的作用及潜在机制.pdfVIP

基底外侧杏仁核-前扣带回皮层-下丘脑外侧区神经通路调控小鼠肠易

激综合征的作用及潜在机制

摘要

目的：

肠易激综合征（irritablebowelsyndrome，IBS）是一种严重影响生活质量的功能

性胃肠道疾病，全球发病率5%~10%，其特征是反复腹痛并伴有异常粪便形状或频

率，与精神因素密切相关。IBS的发病机制非常复杂，临床治疗效果欠佳。因此，深

入探讨IBS相关肠道症状、焦虑样行为及疼痛的调控机制将有助于寻找更有效治疗

IBS的靶点。前扣带回皮层（anteriorcingulatecortex，ACC）在感觉和认知研究中是

一个重要的皮层区域，参与厌恶、恐惧、焦虑、抑郁等情绪处理，并且参与急慢性

疼痛的感知，调控疼痛相关情绪和IBS样症状。下丘脑外侧区（lateralhypothalamus

area，LHA）是可对有害刺激做出反应的脑区，能够控制与疼痛相关的行为反应。基

底外侧杏仁核（basolateralamygdala，BLA）神经元能够为感觉信息赋予情感价值，

并将这些信息整合并传递给下游大脑结构，负责引导和表达情绪，包括焦虑和抑郁。

BLA神经元异常过度活跃在各种精神障碍的病理生理学中起到重要作用。因此，本

研究旨在探讨BLA-ACC-LHA是否存在神经通路以及该通路调控小鼠IBS的作用及

潜在机制。

方法：

1.采用急慢性联合应激（chronicacutecombiningstress，CACS）建立IBS小鼠模型，

在造模期间，观察小鼠体重改变。造模结束后，观察小鼠肠道功能、焦虑样行为

和内脏敏感性。

2.采用核团置管术，观察LHA内微量注射γ-氨基丁酸A型受体（gamma-

aminobutyricacidAreceptor，GABAR）拮抗剂荷包牡丹碱（bicuculline，BIC）

A

或激动剂异四氢烟酸（isoguvacinehydrochloride，Isog）对正常小鼠和IBS小鼠

肠道功能、焦虑样行为和内脏敏感性的调控作用：（1）采用粪便含水量（fecal

moisturecontent，FMC）和第一颗黑便排出时间（firstblackstooldefecationtime，

FDT）实验观察肠道功能；（2）采用旷场实验（openfieldtest，OFT）、高架十字

迷宫（elevatedplusmaze，EPM）和大理石掩埋实验（marble-buryingtest，MBT）

观察焦虑样行为；（3）采用结直肠扩张（colorectaldistention，CRD）实验观察内

脏敏感性。

3.采用荧光金（Flouro-Gold，FG）逆行示踪结合荧光免疫组织化学染色，观察ACC-

LHA的γ-氨基丁酸（gamma-aminobutyricacid，GABA）能神经通路和BLA-ACC

的谷氨酸（glutamicacid，Glu）能神经通路：在小鼠LHA/ACC内注射FG，荧光

免疫组织化学染色观察ACC内FG与GABA免疫阳性神经元共存以及BLA内

FG与Glu免疫阳性神经元共存的情况；采用顺行示踪病毒结合荧光免疫组织化

学染色，观察BLA至ACC的Glu神经元投射至ACC的GABA神经元。

4.采用荧光免疫组织化学染色，观察：（1）IBS小鼠ACC的GABA免疫阳性神经

元和c-Fos、BLA的Glu免疫阳性神经元和c-Fos共表达变化；（2）在正常小鼠

中，化学遗传法激活和抑制ACC的GABA能神经元后，LHA中c-Fos的表达情

况。

5.采用化学遗传法，通过腹腔注射氯氮平N-氧化物（clozapineN-oxide，CNO）或

生理盐水（normalsaline，NS），激活或抑制小鼠ACC中的GABA神经元或BLA

中Glu神经元，观察小鼠IBS样症状变化情况：（1）在正常小鼠ACC内立体定

向注射AAV2/9-mDlx-hM3D(Gq)-