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CHO细胞发酵技术体系解析演讲人：日期:

目录CONTENTS01细胞系基础特性02发酵工艺设计03代谢调控机制04产物质量控制05工艺放大生产06前沿技术进展

01细胞系基础特性

CHO细胞生物学特征CHO细胞是贴壁生长的上皮样细胞，形态扁平、多角，细胞核圆形或椭圆形，有1-2个小核仁。细胞形态与结构细胞生长特性蛋白质表达CHO细胞具有较快的生长速度，能在多种培养基中生长，并且易于进行基因改造和表达外源蛋白。CHO细胞是哺乳动物细胞表达重组蛋白质的重要宿主细胞，具有正确的蛋白质折叠、糖基化等翻译后加工修饰能力。

工业应用核心优势高效表达CHO细胞具有较高的重组蛋白表达水平，且表达产物最接近天然蛋白质。01安全性高CHO细胞在制药工业中应用广泛，具有较低的致瘤性和病毒污染风险。02易于大规模培养CHO细胞适应性强，易于在生物反应器中进行大规模培养，满足工业化生产需求。03

高密度培养技术难点产品质量与稳定性高密度培养过程中，细胞代谢产物的变化可能影响产品质量和稳定性，需严格控制培养条件。03高密度培养时，细胞间相互作用增强，容易导致生长抑制和细胞死亡，需采取措施提高细胞存活率。02生长抑制与细胞死亡营养物供应与代谢物积累在高密度培养条件下，营养物质消耗快，代谢物积累多，需优化培养基组成和营养物浓度。01

02发酵工艺设计

生物反应器选型策略搅拌式生物反应器适用于大规模生产，具有混合均匀、溶氧易于控制等优点生物反应器通过膜组件进行物质交换，实现高效分离和纯化，适用于产品对剪切力敏感或需要连续生产的场合。气升式生物反应器利用气体上升时带动液体循环，提高混合效率，适用于高需氧量的发酵过程。固定化细胞反应器将细胞固定在载体上，提高细胞密度和稳定性，适用于细胞生长缓慢、产物分泌量大的情况。

无血清培养基优化营养成分优化根据细胞生长和产物合成的需求，精确调整培养基中的营养成分和浓度。替代物筛选寻找动物血清的替代物，如植物提取物、蛋白水解物等，降低培养基成本和提高产品质量。去除有害物质去除培养基中可能对细胞生长和产物合成产生抑制作用的成分。优化pH和渗透压维持适宜的pH和渗透压环境，保证细胞正常代谢和生长。

过程控制关键参数温度控制溶氧浓度酸碱度调节生物量监测根据细胞生长和产物合成的最适温度，设定合理的温度控制策略。通过调节通气量和搅拌速度，维持适宜的溶氧浓度，满足细胞生长和产物合成的需求。根据发酵过程中产生的代谢产物和营养物质的消耗，适时调节pH值，保持发酵液环境的稳定。通过在线或离线方式监测细胞密度和生长状态，为工艺控制提供依据。

03代谢调控机制

营养补给动态策略无机盐和维生素供给在发酵过程中及时补充无机盐和维生素，以满足细胞生长和代谢的需要。03通过调节氮源的种类和浓度，影响细胞生长速度和代谢产物的合成。02氮源调控碳源补给根据CHO细胞生长和代谢需求，优化碳源种类和补给时间，确保细胞在发酵过程中的能量供应。01

代谢副产物抑制对策代谢途径改造通过基因工程手段，改变CHO细胞的代谢途径，降低代谢副产物的生成。反馈调节机制产物分离与纯化建立代谢副产物的反馈调节机制，当副产物积累到一定程度时，能够自动调节代谢途径，降低其生成速度。通过优化发酵工艺和设备，及时将代谢副产物从发酵液中分离出来，减少对细胞的抑制作用。123

通过添加特定的凋亡诱导因子，如某些化学物质、生物因子等，能够诱导CHO细胞在发酵过程中发生凋亡，从而减少细胞数量、降低代谢负担。细胞凋亡干预技术细胞凋亡诱导因子通过基因工程或药物处理等手段，抑制CHO细胞在发酵过程中的凋亡，提高细胞存活率和产物产量。细胞凋亡抑制技术深入研究细胞凋亡与产物合成之间的关系，寻找最佳的凋亡调控策略，以实现高产稳产。细胞凋亡与产物关系研究

04产物质量控制

糖基化检测指标通过测定糖链的种类、数量、连接方式和分支结构等，确保糖基化修饰程度符合预期。糖基化修饰程度检测蛋白质上糖基化修饰的位点，确保糖基化修饰发生在正确位置。糖基化位点分析评估糖基化修饰在储存和加工过程中的稳定性，确保产品质量的稳定。糖基化修饰稳定性

蛋白表达稳定性标准蛋白表达量稳定性蛋白结构稳定性蛋白活性稳定性通过多次表达，检测蛋白表达量的稳定性，确保每次表达都能获得足够的产物。检测蛋白在不同条件下的活性，包括温度、pH、离子强度等，确保蛋白在储存和加工过程中保持活性。通过比对表达产物的结构，确保蛋白的结构与天然蛋白相似，保持其功能特性。

杂质清除验证方法通过适当的检测方法，如高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）等，检测产品中的杂质残留量，确保符合相关标准。杂质残留量检测杂质清除效率验证杂质毒性评估通过对比杂质在提取、纯化等过程中的清除效率，验证杂质清除方法的可靠性。对可能残留的杂质进行毒性评估，确保产品安