核酸的理化性质课件.pptVIP

核酸的理化性質——核酸的變性、複性1、核酸的變性（denaturation）核酸的理化性質——核酸的變性、複性1、核酸的熱變性（denaturation）用加熱的方法使DNA變性叫做熱變性DNA的變性過程是爆發性的，它在很窄的溫度區間內完成。因此，通常將DNA的變性達到50%時，即增色效應達到一半時的溫度稱為DNA的熔解溫度（meltingtemperature,Tm）,Tm也稱DNA的熔點。一般DNA的Tm值在70-85?C之間核酸的理化性質——核酸的變性、複性1、核酸的變性（denaturation）Tm與下列因素有關：1）DNA的均一性：均質DNA的熔解過程發生在一個較小的溫度範圍內；異質DNA的熔解過程發生在一個較寬的溫度範圍內。*****************核酸的理化性質核酸的理化性質——一般物理性質DNA為白色纖維狀固體，RNA為白色粉末狀固體。都微溶於水，其鈉鹽在水中的溶解度較大。但不溶於乙醇、乙醚和氯仿等一般有機溶劑。DNA和RNA在細胞中常以核酸—蛋白複合體（核蛋白）形式存在，兩種核蛋白在鹽溶液中的溶解度不同。DNA核蛋白RNA核蛋白0.14mol/LNaCl-+1-2mol/LNaCl+-核酸分子量大，1.6*106-8*1010DNA溶液的粘度很大，而RNA溶液的粘度小得多。核酸發生變性或降解後其粘度降低。核酸受到強大離心力的作用時，可從溶液中沉降下來，其沉降速度與核酸的大小和密度有關。一、核酸的理化性質——核酸的水解1、酸水解核苷酸的糖苷鍵和磷酸二酯鍵均可被酸水解，但糖苷鍵比磷酸二酯鍵更易被酸水解。水解水解核酸的理化性質——核酸的水解2、堿水解RNA的磷酸鍵易被堿水解，產生核苷酸，DNA的磷酸鍵則不易水解，因為RNA上2‘-OH基，在堿作用下易形成磷酸三酯而易水解。水解核酸的理化性質——核酸的水解3、酶水解非特異性水解多聚核苷酸鏈中磷酸二酯鍵的酶稱為磷酸二酯酶，特異性水解核酸的磷酸二酯酶稱為核酸酶DNA水解酶（DNases）以DNA為底物，RNA水解酶（RNases）以RNA為底物。根據作用方式又分作兩類：核酸外切酶和核酸內切酶。核酸外切酶的作用方式是從多聚核苷酸鏈的一端（3′-端或5′-端）開始，逐個水解切除核苷酸；核酸內切酶的作用方式剛好和外切酶相反，它從多聚核苷酸鏈中間開始，在某個位點切斷磷酸二酯鍵。在分子生物學研究中最有應用價值的是限制性核酸內切酶。這種酶可以特異性的水解核酸中某些特定堿基順序部位。3、酶水解核酸的理化性質——核酸的水解牛胰核糖核酸酶（RNaseI）作用位點為嘧啶核苷-3`-磷酸與其它核苷酸之間的連鍵，產物為3`-嘧啶核苷酸；或以3`-嘧啶核苷酸結尾的寡核苷酸。核酸的理化性質——核酸的水解3、酶水解限制性內切酶是一類重要的作用於DNA的內切酶限制性內切酶識別部位一般都是由4-8個堿基對組成的一段序列，而且有一個二重對稱軸，即5`-3`方向殘基序列在DNA的兩條鏈上是一樣的，這樣的序列稱為回文結構。E.CoRI是一個重要的限制性內切酶，它識別由6個堿基對組成的特殊序列（每條鏈上是GAATTC）。大多數限制性內切酶都是將雙鏈DNA切開，形成兩個粘性末端（帶有與另一末端互補的單鏈）限制性內切酶往往與一種甲基化酶同時成對的存在，它們具有相同的底物專一性，具有識別相同堿基序列的能力。核酸的理化性質——核酸的水解3、酶水解限制性內切酶的作用特點：專用於降解異源DNA具有特異的識別序列性質比較穩定同時水解DNA兩條鏈，形成的DNA片段有平末端和黏末端兩種。核酸的理化性質——核酸的水解3、酶水解5`——N—N—N—N—G—A—A—T—T—C—N—N—N—N——3`3`——N—N—N—N—C—T—T—A—A—G—N—N—N—N——5`5`——N—N—N—N—GA—A—T—T—C—N—N—N—N——3`3`——N—N—N—N—C—T—T—A—AG—N—N—N—N——5`E.coRI核酸的理化性質——核酸的水解3、酶水解與蛋白質相似，RNA分子中既含有酸性基團（磷酸基）也含有弱鹼性堿基基團，因而RNA也具有兩性性質。由於RNA分子中的磷酸是一個中等強度的酸，而堿基呈現弱鹼性，所以RNA的等電點比較低。（當核酸分子內的酸性解離和鹼性解離相等，本身所帶的正電荷與負電荷相等時，此時核酸溶