核酸的生物合成课件.pptVIP

大腸桿菌DNA聚合酶Ⅲ全酶的結構和功能?????????延長因數DNA聚合酶Ⅲ兩個?亞基夾住DNADNA聚合酶Ⅲ異二聚體核心酶校對引物的結合和識別促使核心酶二聚化原核生物DNA聚合酶－真核DNA聚合酶聚合酶DNA連接酶(DNAligase)可催化兩段DNA片段之間磷酸二酯鍵的形成，從而把兩段相鄰的DNA鏈連接成一條完整的鏈。6、DNA連接酶功能連接複製過程形成的DNA片段,形成一個3′,5′-磷酸二酯鍵連接酶ATGCCGPPOHAPTATGCCGPAPTP連接酶DNA連接酶ATP（NAD+）ADP+Pi（NMN++AMP）HO5’3’5’3’3’5’5’3’DNA連接酶的連接作用連接酶連接切口Mg2+連接酶ATP或NAD＋AMP+PPi或NMN+AMPATCGPTTPPPAACCTGAPACPPPPOHTGGATCGPTTPPPAACCTGAPACPPPTGGP缺口33555533範本鏈範本鏈DNA連接酶催化的條件是：①需一段DNA片段具有3-OH，而另一段DNA片段具有5-Pi基；②未封閉的缺口位於雙鏈DNA中，即其中有一條鏈是完整的；③需要消耗能量，在原核生物中由NAD+供能，在真核生物中由ATP供能。DNA連接酶在複製中起最後接合缺口的作用。在DNA修復、重組及剪接中也起縫合缺口作用。是基因工程的重要工具酶之一。DNA連接酶的作用DNA複製酶系總覽（三）原核生物DNA複製DNA+n1dATPn2dGTPn3dCTPn4dTTPDNA+(n1+n2+n3+n4)PPiＤＮＡ聚合酶Mg2+以四種dNTP為底物在DNA範本指令下，按堿基配對的原則，由DNA聚合酶催化，向DNA的3′－OH端添加核苷酸，以5′→3′的方向合成與範本互補的新鏈。1、複製的起始原核生物：特定位點開始，特定位點終止，只有一個複製子。（基因組能獨立進行複制的單位）。真核生物：多個位點起始，多複製子。大腸桿菌複製起始點：oriC（original）終止點：ter（terminate）一些特殊的Pr可以識別並結合到複製起點，隨即使DNA雙螺旋局部解鏈，形成複製眼，在其兩端的DNA的兩股鏈呈丫字狀，稱為複製叉。分別向兩側進行複製，通常複製叉雙向等速前進，迅速生長的細菌，第一輪複製未完成就啟動第二次複製。DNA複製的起始階段，由下列兩步構成。1．解旋解鏈，形成複製叉：由拓撲異構酶和解鏈酶作用，使DNA的超螺旋及雙螺旋結構解開，堿基間氫鍵斷裂，形成兩條單鏈DNA。單鏈DNA結合蛋白（SSB）四聚體結合在兩條單鏈DNA上，形成複製叉。2．引發體組裝和引物合成：由解螺旋酶(DnaB蛋白)、DnaC蛋白、引物酶(DnaG蛋白)和DNA複製起始區域形成引發體；在引物酶的催化下，以DNA為範本，合成一段短的RNA片段，從而獲得3端自由羥基（3-OH）。535dATPdGTPdTTPdCTPdTTPdGTPdATPdCTPOH33DNA-polDNA複製的延長過程2、DNA鏈的合成與延伸領頭鏈的合成過程隨從鏈的合成過程DNA聚合酶ⅢRNA引物領頭鏈的合成是連續的，而隨從鏈的合成是不連續的，為什麼？複製過程簡圖解螺旋酶3′5′5′3′3′5′DNA拓撲異構酶ⅡDNA聚合酶Ⅲ引發體連接酶DNA複製系統SSPDNA聚合酶I原核生物基因是環狀DNA，雙向複製的複製片段在複製的終止點(ter)處匯合。E.colioriter8232oriterSV405003、複製的終止在複製過程中形成的RNA引物，需由RNA酶來水解去除；RNA引物水解後遺留的缺口，由DNA聚合酶Ⅰ（原核生物）或DNA聚合酶?（真核生物）催化延長缺口處的DNA，直到剩下最後一個磷酸酯鍵的缺口。（1）去除引物，填補缺口：在DNA連接酶的催化下，生成最後一個磷酸酯鍵，將岡崎片段連接起來，形成完整的DNA長鏈。（2）連接岡崎片段5?5?5?RNA酶OHP5?DNA-polⅠdNTP5?5?PATPADP+Pi5?5?DNA連接酶隨從鏈上不連續性片段的