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2025年pcr岗前培训考试试题及答案

一、单项选择题（每题2分，共20题，40分）

1.下列关于PCR技术的描述，错误的是：

A.依赖DNA聚合酶的链式扩增反应

B.基本步骤为变性-退火-延伸

C.可用于微量DNA的定性或定量检测

D.扩增产物长度由Taq酶活性决定

答案：D（扩增产物长度由引物在模板上的结合位置决定）

2.PCR实验室“试剂准备区”的核心操作要求是：

A.处理已扩增的PCR产物

B.进行样本核酸提取

C.配制不含模板的反应体系

D.分析扩增曲线数据

答案：C（试剂准备区需严格避免模板污染，仅用于反应体系配制）

3.定量PCR（qPCR）中，Ct值的定义是：

A.荧光信号达到阈值时的扩增循环数

B.扩增产物浓度达到平台期的循环数

C.引物与模板完全结合的温度值

D.反应体系中Mg2+的最佳浓度值

答案：A（Ct值为荧光信号超过设定阈值时的循环数，与初始模板量成反比）

4.下列引物设计原则中，错误的是：

A.引物长度建议18-25个碱基

B.避免3’端互补形成二聚体

C.GC含量应控制在40%-60%

D.引物Tm值差异需大于5℃

答案：D（引物Tm值差异应小于2℃，避免扩增效率不一致）

5.PCR反应体系中，Mg2+的主要作用是：

A.稳定DNA双链结构

B.激活TaqDNA聚合酶活性

C.防止核酸酶降解模板

D.提高退火温度特异性

答案：B（Mg2+是Taq酶的辅因子，浓度过高会降低扩增特异性）

6.核酸提取过程中，若使用酚-氯仿法，离心后有机相（下层）主要含：

A.蛋白质和脂类

B.核酸

C.盐离子

D.变性的RNA酶

答案：A（酚-氯仿法中，有机相沉淀蛋白质，水相（上层）含核酸）

7.PCR实验室空气消毒首选方法是：

A.75%乙醇喷洒

B.紫外线照射（波长254nm）

C.过氧乙酸熏蒸

D.臭氧发生器消毒

答案：B（紫外线对DNA/RNA有强破坏作用，是实验室空气消毒的常规手段）

8.关于生物安全柜的使用，错误的是：

A.操作前需开机运行10分钟以上

B.手臂进出时应缓慢，避免气流扰动

C.所有物品需经75%乙醇擦拭后放入

D.实验结束后立即关闭电源

答案：D（实验结束后应继续运行10-15分钟，确保残留气溶胶被过滤）

9.下列情况中，最可能导致PCR假阳性的是：

A.样本核酸提取时操作时间过长

B.扩增产物污染实验室环境

C.模板DNA中存在抑制物

D.引物Tm值低于退火温度

答案：B（扩增产物（阳性模板）污染会导致非目标样本出现扩增信号）

10.定量PCR标准曲线的R2值应至少达到：

A.0.90

B.0.95

C.0.98

D.1.00

答案：C（标准曲线R2≥0.98为可接受范围，反映扩增效率的一致性）

11.核酸提取时，加入β-巯基乙醇的主要目的是：

A.裂解细胞膜

B.抑制RNA酶活性

C.沉淀DNA

D.提高离心效率

答案：B（β-巯基乙醇可破坏RNA酶的二硫键，防止RNA降解）

12.PCR反应中，延伸温度通常设置为：

A.55-65℃

B.72℃

C.94-98℃

D.4℃

答案：B（Taq酶最适延伸温度为72℃，此时DNA合成效率最高）

13.实验室发生样本泄漏（含新冠病毒核酸）时，应急处理首选：

A.用纸巾直接擦拭

B.覆盖10%次氯酸钠溶液30分钟后清理

C.喷洒75%乙醇后立即擦拭

D.用蒸馏水冲洗

答案：B（次氯酸钠可有效灭活病毒核酸，作用时间需≥30分钟）

14.关于内参基因的选择，错误的是：

A.需在所有检测样本中稳定表达

B.扩增效率应与目标基因一致

C.可以是管家基因（如GAPDH）

D.表达量需显著高于目标基因

答案：D（内参基因仅用于标准化样本上样量，表达量无需高于目标基因）

15.下列PCR污染预防措施中，不包括：

A.分区使用专用移液器

B.扩增后产物在阳性区处理

C.定期更换实验服和手套

D.反应体系配制时戴口罩

答案：B（扩增产物（阳性模板）应在独立的产物分析区处理，严禁返回前区）

16.核酸浓度测定时，OD260/OD280比值为1.2，提示样本可能：

A.蛋白质污染

B.多糖污染

C.RNA污染

D.纯度良好

答案