（人教版）高中生物学选择性必修3 生物技术与工程导学案 第3章　第2节　基因工程的基本操作程序.pptxVIP

;;问题式预习;(2)DNA复制所需的基本条件;(3)过程;①过程Ⅰ为______，该阶段的温度超过_________，目的是使_____

__________________。

②过程Ⅱ为______，该阶段的温度为_________左右，两条单链DNA的3′端与[C]______结合，遵循__________________原则。

③过程Ⅲ为______，该阶段的温度为______左右，该过程需要在[D]__________________酶的催化下，利用________________为原料，根据碱基互补配对原则子链从______(填“3′端”或“5′端”)到______(填“3′端”或“5′端”)延伸合成新的子链DNA。

④仪器：PCR扩增仪。

⑤产物鉴定方法：_____________________。;二、基因表达载体的构建

1．目的：使目的基因在受体细胞中____________，并且遗传给下一代；并使目的基因能够_____________________。

2．基因表达载体的构建过程：一般用同种或能产生相同末端的______酶分别切割载体和含有目的基因的DNA片段，再用________

酶把两者连接，形成一个重组DNA分子(如下图所示)。;3．基因表达载体的组成及作用;三、将目的基因导入受体细胞

1．转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持_____

_______的过程。

2．转化方法

(1)导入植物细胞

①花粉管通道法

Ⅰ.用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注入______中。

Ⅱ.在植物受粉后的一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助_______________进入______。;②农杆菌转化法

Ⅰ.农杆菌的特点：农杆菌能在自然条件下侵染_________植物和______植物；农杆菌的Ti质粒上的____________能够整合到所侵染细胞的_____________上。

Ⅱ.转化方法：将目的基因插入农杆菌_________________中，让农杆菌侵染植物细胞。;(2)导入动物细胞

①常用方法：__________________。

②常用受体细胞：_________。

(3)导入微生物细胞

①方法：用______处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。

②受体细胞：____________(使用最广泛的是大肠杆菌)。

③原核生物的特点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等。;四、目的基因的检测与鉴定

1．分子水平的检测(连线);五、DNA片段的扩增及电泳鉴定

1．实验原理

(1)PCR利用了DNA的_________原理，通过调节温度来控制DNA双链的_______________。

(2)在凝胶中DNA分子的迁移速率与____________________________

_________等有关。

(3)电泳：在一定的pH下，DNA分子中具有的___________可以带上正电荷或负电荷。在电场的作用下，这些带电分子向着__________

________的电极移动。

(4)PCR产物的鉴定方法：_________________。;2．目的要求

(1)了解PCR和电泳鉴定的基本原理。

(2)尝试进行PCR的基本操作并用电泳鉴定PCR的产物。

3．方法步骤

(1)DNA片段的扩增;(2)DNA片段的电泳鉴定过程;步骤;1．[教材P77“相关信息”]Bt抗虫蛋白能造成害虫死亡，为何对人畜无害？

提示：Bt抗虫蛋白只有在某类昆虫肠道的碱性环境中才能表现出毒性，而人和牲畜的胃液呈酸性，肠道细胞也没有特异性受体。

2．[教材P77“相关信息”]为什么PCR反应缓冲液中要添加Mg2＋？引物是什么？

提示：因为真核细胞和细菌的DNA聚合酶都需要Mg2＋激活。引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸。;3．[教材P78图3-5]PCR技术为什么需要引物？利用PCR技术扩增目的基因时需要两种引物，原因是什么？

提示：DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸，合成DNA。目的基因的两条反向平行的核苷酸链都可作为模板，其碱基序列不同，所以需要两种引物。;1．即使目的基因的核苷酸序列是完全未知的，也可用PCR技术得到大量目的基因。()

2．一个目的基因(双链DNA片段)在PCR仪中经n次循环可得到(2n－1)个目的基因。()

3．切割含抗虫基因的DNA片段和载体必须用同一种限制酶。()

4．用Ca2＋处理土壤农杆菌是重组Ti质粒导入土壤农杆菌过程中的重要步骤。()

5．可用较高浓度的盐水浇灌来鉴定棉花植株的耐盐性。();任务型课堂;A．PCR1过程中的产物AB是依