獭兔白细胞介素 - 2基因克隆与真核表达的深度剖析与应用展望.docxVIP

獭兔白细胞介素-2基因克隆与真核表达的深度剖析与应用展望

一、引言

1.1研究背景

白细胞介素-2（Interleukin-2，IL-2）作为一种关键的细胞因子，在免疫系统中扮演着核心角色。它由Th1细胞在有丝分裂原刺激且巨噬细胞提供IL-1的情况下产生，对免疫应答的调节具有不可或缺的作用。IL-2能够刺激活化的T细胞生长和分化，显著增强T细胞的杀伤活性，这对于抵御病原体入侵、清除体内异常细胞至关重要。同时，它还能刺激白血病细胞的增殖和产生免疫球蛋白，促进B细胞表达白介素-2的受体，在体液免疫中发挥重要作用。此外，IL-2可刺激单核巨噬细胞的细胞毒活性，促进NK细胞的增殖并增强其杀伤活性，是扩增和激活LAK和TIL细胞的必要因子，对少突神经胶质细胞也有刺激增生和促进分泌细胞因子的作用，全面提升机体的细胞免疫和体液免疫功能。由于其在免疫调节中的关键地位，IL-2被广泛应用于免疫治疗领域，如癌症治疗中，可增强患者的免疫功能以对抗肿瘤细胞；在自身免疫性疾病的研究和治疗尝试中，也期望通过调节IL-2的水平或活性来改善病情。

獭兔，学名力克斯兔（BreedRex），是世界著名的皮用兔，因其繁殖力高、生产周期短、见效快，具有很高的经济价值，在全球范围内广泛养殖，我国上世纪80年代开始普及饲养，目前獭兔存栏量已达2000万只以上，居世界第一。同时，獭兔也是重要的实验动物之一，其免疫系统与人类有较高的相似度，这使得对獭兔免疫系统相关的研究不仅有助于提高獭兔养殖过程中的抗病能力，减少因疾病（如兔出血症、兔巴氏杆菌及兔球虫病等）和体表寄生虫（如兔疥螨、蜱类等）侵害造成的经济损失，还能为人类免疫系统的研究提供有价值的参考。在当前兽医领域，传统疫苗和抗生素面临着传染病原体变异和抗生素耐药性不断增加的挑战，利用细胞因子作为免疫佐剂成为安全、经济和有效提高全身抵抗传染病原体免疫水平的新方向，而对獭兔IL-2基因的研究是这一方向的重要基础。

1.2研究目的与意义

本研究旨在克隆獭兔IL-2基因并进行真核表达。通过克隆獭兔IL-2基因，能够获得其基因序列信息，深入了解獭兔IL-2基因的结构和特点。进行真核表达则可以获得大量具有生物活性的IL-2蛋白，为后续研究提供物质基础。

这一研究对于揭示獭兔免疫系统调节机制具有重要意义。IL-2在免疫系统中起着关键的调节作用，研究獭兔IL-2基因的克隆及真核表达，有助于深入探究獭兔免疫系统中T细胞、B细胞、NK细胞等免疫细胞的活化、增殖和分化过程，以及它们之间的相互作用机制，从而全面了解獭兔免疫系统的工作原理。在实际应用中，为獭兔疾病的防治提供新的思路和方法。通过对IL-2的研究，可以开发基于IL-2的免疫增强剂或免疫治疗方法，提高獭兔的免疫力，减少疾病的发生，促进獭兔养殖业的健康发展。从更广泛的角度来看，獭兔免疫系统与人类的相似度使得该研究成果能够为人类免疫研究提供参考。在人类免疫治疗领域，如癌症免疫治疗、自身免疫性疾病治疗等方面，獭兔IL-2的研究成果可能为新的治疗策略和药物研发提供启示和借鉴。

1.3国内外研究现状

自1983年Taniguchi首次克隆了人的IL-2cDNA以来，截至目前，至少有30多种哺乳动物的IL-2基因已被成功克隆。在兔类研究方面，Perkins等首次报道了欧洲野兔IL-2基因序列，2007年，黄道超和杨光友等成功克隆出中国白兔IL-2基因。

对于獭兔IL-2基因克隆，最早在20世纪80年代末期，研究人员采用PCR技术从獭兔淋巴组织中扩增出一段序列，并通过测序确定为獭兔IL-2基因（Gollobetal.,1989）。此后，其他研究者又分别运用PCR、cDNA文库筛选、基因组克隆等方法，从獭兔T淋巴细胞和淋巴组织中获得了不同的IL-2cDNA或基因（Lawsonetal.,1996;Yamadaetal.,2002;Kimetal.,2005）。研究发现不同的獭兔IL-2基因的DNA序列在长度和结构上存在一定差异，例如Yamada等人克隆的獭兔IL-2基因共包含526个氨基酸，与已知的其他物种IL-2氨基酸序列比较，共有35%的一级结构不同，尤以第三个外显子的区域差异最大（Yamadaetal.,2002）。

在獭兔IL-2的真核表达方面，目前已有数种携带獭兔IL-2基因的真核表达载体被构建出来。2013年，Harihar