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鸡球虫病的诊断研究国内外文献综述

目录

TOC\o1-3\h\u32441鸡球虫病的诊断研究国内外文献综述 1

33961.1传统方法 1

294911.2血清学诊断 1

56041.3分子生物学诊断 2

21701参考文献 4

1.1传统方法

传统方法一般根据临床症状、肠道病变、寄生部位、致病性和卵囊形态等指标来诊断鸡球虫病（李建梅等2009；JoynerandLong1974）。鸡感染不同种类的球虫往往出现不同的临床症状和肠道病变，如感染高致病性的E.tenella或E.necatrix会出现精神沉郁、翅膀下垂、食欲减退、腹泻、排血便甚至死亡，死后剖检可见被寄生部位的肠段高度肿大，呈深红色，浆膜层出现针尖大小的白色坏死点或大小不一的出血点，剪开肠道可见大量血凝块、粘液和坏死的肠黏膜，肠壁变薄；而感染E.mitis和E.praecox则主要表现为吸收不良、增重和饲料转化率降低，肠道病变也较轻（李武尧2012；汪明2003）。临床上，单个宿主常感染多种鸡球虫，从而导致肠道中寄生部位的重叠以及病变范围的变化；而同种球虫的不同虫株在致病性方面往往也存在差异，不能单独作为判断种类的依据（Shirley1985）。临床常用直接涂片法或饱和盐水漂浮法检查粪便样品中的卵囊来判断是否存在球虫感染，利用麦克马斯特氏法（MacMaster′smethod）得到每克粪便卵囊数（Oocystspergramoffeces，OPG）还能一定程度反映球虫的感染强度（汪明2003）。但若想通过卵囊形态鉴别鸡球虫种类，除了E.maxima有较大的淡黄色卵囊易于区分外，其它鸡球虫卵囊无极冒，无明显的卵孔，卵囊壁的结构和质地相似，孢子囊的形状和大小也无明显区别，因此鉴别有一定难度且需要专业人员（LongandJoyner1984）。

1.2血清学诊断

目前有很多用于检测鸡球虫病的血清学方法，如中和试验、琼脂免疫扩散法、子孢子和裂殖子溶解试验、子孢子制动反应、间接荧光抗体法和酶联免疫吸附试验（Enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）等（Davisetal.1978）。Saatara等（1984）利用ELISA和间接血凝法（Indirecthemagglutilation，IHA）测定实验感染鸡对柔嫩艾美耳球虫的抗体反应，ELISA技术相对容易操作，比IHA检测更敏感，而且只需要IHA所需抗原的一小部分。Uchida等（1994）用卵囊制备的可溶性抗原进行ELISA发现，3种球虫（E.tenella、E.necatrix、E.acervulina）免疫鸡血清之间存在交叉反应，其中E.tenella和E.necatrix之间的交叉反应更为明显。利用免疫印迹法检测E.tenella卵囊抗原，同源抗血清检测出7条主条带，E.necatrix和E.acervulina抗血清分别检测出10条和6条主条带。

1.3分子生物学诊断

1.3.1同工酶分析

早期Shirley（1975）利用同工酶分析，发现6种艾美耳球虫（E.brunetti、E.tenella、E.acervulina、E.maxima、E.praecox、E.necatrix）的乳酸脱氢酶、葡萄糖磷酸异构酶、6-磷酸葡萄糖脱氢酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的淀粉凝胶电泳存在种内和种间差异，可以作为鉴别鸡球虫种类的指标，但由于试验分析需要大量的卵囊和复杂的操作，此方法的临床应用受到了一定程度的限制。

1.3.2限制性片段长度多态性分析（Restrictionfragmentlengthpolymorphismanalysis，RFLP）

Ellis和Bumstead（1990）首次将印迹分析（Southernblot）结合RFLP应用于鸡球虫鉴定，成功区分E.tenella、E.acervulina和E.necatrix等三种球虫。后来Woods等（2000）在变性凝胶上对第二内转录间隔区（Internaltranscribedspacer2，ITS-2）的扩增产物进行RFLP分析，制出了单个物种的特征图谱，成功对澳大利亚的6种鸡球虫种类（除了E.mitis）进行了鉴定，同时也证明ITS-2是具有实用性的遗传标记。

1.3.3随机扩增多态性DNA（RandomamplifiedpolymorphicDNA，RAPD）

Macpherson和Gajadhar（1993）首次利用RAPD技术成功鉴别来自不同宿主的7种艾美耳球虫，其中一种来自于鸡（E.tenella）。刘群