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2025年临床分子生物学检验模拟题集及解析

一、临床基因扩增技术

1.【单项选择】实时荧光定量PCR中，若标准曲线斜率为3.32，扩增效率最接近

A.90%B.95%C.100%D.105%

答案：C

解析：斜率=3.32时，效率E=10^(1/斜率)1=1.00，即100%。

2.【单项选择】ARMSPCR检测EGFRL858R突变，野生型探针5′端标记FAM，突变型探针标记VIC。若某样本FAMCt=28.1、VICCt=24.6，则判读结果为

A.野生型B.突变纯合C.突变杂合D.无法判断

答案：C

解析：ΔCt=VICFAM=3.5，系统阈值ΔCt≤3判定为突变杂合。

3.【单项选择】数字PCR微滴经终点荧光读取后，出现“rain”现象，最可能的原因是

A.退火温度过高B.探针浓度过量C.微滴生成时油水比偏低D.引物二聚体

答案：C

解析：油水比不足导致微滴大小不均，荧光分布弥散呈rain。

4.【单项选择】HRM分析检测KRAS密码子12突变，熔解曲线在84.7℃出现额外熔解峰，提示

A.G12DB.G12VC.G12CD.G12S

答案：B

解析：G12V（GTT）使PCR产物Tm升高0.8℃，与84.7℃匹配。

5.【单项选择】RTqPCR检测BCRABL1转录本，内参基因选择ABL1而非GAPDH的主要原因是

A.ABL1表达更稳定B.避免伪基因干扰C.扩增片段长度一致D.两者均可

答案：B

解析：GAPDH存在大量伪基因，易与融合基因交叉扩增。

6.【多项选择】下列哪些措施可降低qPCR引物二聚体形成

A.降低引物浓度B.采用热启动TaqC.增加Mg2?浓度D.使用LNA修饰引物

答案：ABD

解析：Mg2?升高会促进非特异配对。

7.【多项选择】关于环介导等温扩增（LAMP），正确的是

A.需4条引物B.扩增产物为茎环结构C.可肉眼观察浊度D.对抑制物耐受性高于qPCR

答案：BCD

解析：LAMP需6条引物（F3/B3、FIP/BIP、LF/LB）。

8.【案例分析】患者男，58岁，肺腺癌术后，qPCR检测EGFR19号外显子缺失，Ct=31.5，内参Ct=22.0。实验室突变丰度cutoff=1%，已知突变型与野生型扩增效率一致，求突变丰度并给出临床建议。

答案：突变丰度=2^(ΔΔCt)=2^9.5≈0.14%，低于cutoff，建议结合NGS复测或动态监测。

9.【填空】在CFTRΔF508突变检测中，3碱基缺失导致PCR产物长度由______bp变为______bp。

答案：98；95

10.【简答】简述qPCR中“ΔRn”概念及其在阈值设定中的作用。

答案：ΔRn=Rn(样本)Rn(基线)，用于去除背景荧光；阈值设定于ΔRn指数扩增期的几何阶段，确保Ct值与起始模板对数呈线性。

二、核酸提取与质量控制

11.【单项选择】血浆游离DNA提取，磁珠法最后一步洗脱体积为50μl，若Qubit测得浓度0.8ng/μl，则总回收量约为

A.20ngB.30ngC.40ngD.50ng

答案：C

解析：0.8×50=40ng，考虑10%测量误差，最接近40ng。

12.【单项选择】提取RNA后，Agilent2100RIN=5.8，提示

A.RNA完整性好B.轻度降解C.重度降解D.有基因组DNA污染

答案：B

解析：RIN≥7为完整，46为轻度降解。

13.【单项选择】哪种试剂可有效去除gDNA污染以获得高纯度RNA

A.蛋白酶KB.DNaseIC.RNaseAD.CTAB

答案：B

14.【多项选择】关于cfDNA片段特征，正确的是

A.主峰约166bpB.肿瘤患者可见90bp小峰C.EDTA管保存72h片段会缩短D.片段大小与核小体定位相关

答案：ABD

解析：EDTA管保存过久cfDNA总量减少但主峰不变。

15.【案例分析】提取石蜡包埋组织DNA，Qubit浓度12ng/μl，260/280=1.05，260/230=0.65，PCR扩增失败，最可能原因及改进措施？

答案：260/2301表明盐或有机溶剂污染，抑制Taq活性；改进：增加80%乙醇洗涤次数，延长干燥时间，稀释模板降低抑制物浓度。

16.【填空】用于评估NGS文库质量的Bioanalyzer指标中，主峰前方小峰称为______峰，提示______。

答案：接头二聚