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结核分枝杆菌感染检测技术应用专家共识解读

结核分枝杆菌（Mycobacteriumtuberculosis，MTB）感染的精准检测是结核病防控与临床诊疗的关键环节。近年来，随着分子生物学、免疫学及微生物学技术的快速发展，MTB检测手段日益丰富，但不同技术的适用场景、敏感性、特异性及临床价值存在显著差异。为规范检测流程、提升结果可靠性，相关领域专家基于循证医学证据及临床实践需求，形成了《结核分枝杆菌感染检测技术应用专家共识》（以下简称“共识”）。本文围绕共识核心内容，从检测技术分类、关键技术要点、质量控制规范及临床应用策略四方面展开解读。

一、检测技术分类与核心特点

MTB感染检测技术可分为病原学检测、免疫学检测及新兴技术三大类，各类技术在检测目标（活菌/死菌、抗原/抗体/细胞免疫应答）、样本类型、检测周期及临床价值上各有侧重。

（一）病原学检测技术

病原学检测以直接检出MTB菌体或其成分（核酸、蛋白质）为目标，是确诊结核感染的“金标准”依据。

1.涂片镜检：通过抗酸染色（如萋-尼染色或荧光染色）观察样本中的抗酸杆菌（AFB）。萋-尼染色需光学显微镜观察，荧光染色结合荧光显微镜可提高检出效率。该技术操作简便、成本低，15-30分钟可出结果，适用于基层医院及大规模筛查。但敏感性仅为30%-70%（痰涂片），且无法区分MTB与非结核分枝杆菌（NTM），阳性结果需结合临床进一步确认。

2.分枝杆菌培养：分为固体培养（如罗氏培养基）和液体培养（如BACTECMGIT960系统）。固体培养需2-8周观察菌落生长，液体培养通过检测代谢产物（如二氧化碳）缩短至5-14天，且敏感性较涂片提高约20%。培养阳性可明确MTB活菌存在，并用于药物敏感性试验（DST），是耐药检测的基础。但培养周期长、操作复杂，需生物安全三级（BSL-3）实验室条件，限制了其在急诊或重症患者中的应用。

3.分子生物学检测：以核酸扩增（NAAT）技术为核心，包括聚合酶链反应（PCR）、恒温扩增（如环介导等温扩增LAMP）及核酸杂交技术（如线性探针杂交LPA）。

-XpertMTB/RIF：基于实时荧光PCR，可同时检测MTB复合群（MTBC）及利福平耐药相关的rpoB基因突变。2小时内完成检测，对涂阳痰标本敏感性＞95%，涂阴标本约60%-70%，利福平耐药检测特异性＞99%。共识推荐其作为疑似肺结核的一线快速检测，尤其适用于HIV合并结核、儿童结核及耐药高风险人群。

-LPA：通过探针杂交检测MTB的rpoB（利福平）、katG（异烟肼）等耐药相关基因，可同时报告菌种（MTBC/NTM）及耐药表型。检测周期约8小时，敏感性与培养相当，适用于培养阳性标本的快速耐药筛查或无法开展培养的实验室。

-全基因组测序（WGS）：通过高通量测序分析MTB全基因组，可同时检测多药耐药（MDR）、广泛耐药（XDR）相关突变及菌株分型。检测周期约3-5天，准确性高，但成本较高，主要用于耐药机制研究、流行病学溯源及疑难耐药病例的精准诊断。

（二）免疫学检测技术

免疫学检测通过检测宿主对MTB抗原的免疫应答（体液免疫或细胞免疫）辅助诊断，主要用于潜伏结核感染（LTBI）筛查及活动性结核的辅助判断。

1.结核菌素皮肤试验（TST）：皮内注射结核菌素纯蛋白衍生物（PPD），48-72小时测量硬结直径。阳性反应提示MTB感染，但无法区分LTBI与活动性结核，且受卡介苗（BCG）接种及NTM交叉反应影响，特异性较低（约50%-70%）。共识指出，TST可作为资源有限地区LTBI初筛手段，但需结合临床综合判断。

2.γ-干扰素释放试验（IGRA）：包括酶联免疫吸附试验（ELISA，如QuantiFERON-TBGoldPlus，QFT-GP）和酶联免疫斑点试验（ELISPOT，如T-SPOT.TB）。通过检测MTB特异性抗原（ESAT-6、CFP-10等）刺激后外周血单个核细胞（PBMC）释放的IFN-γ水平，判断是否存在MTB感染。IGRA不受BCG接种影响，特异性＞95%，对LTBI的诊断效能优于TST。共识推荐IGRA用于高风险人群（如HIV感染者、器官移植受者）的LTBI筛查，以及TST结果不确定时的补充检测。

（三）新兴检测技术

1.宏基因组测序（mNGS）：通过无偏倚测序分析样本中所有微生物核酸，可同时检测MTB及合并感染的其他病原体（如细菌、真菌、病毒）。对传统检测阴性的肺外结核（如结核性脑膜炎、淋巴结结核）及菌阴肺结核具有较高诊断价值，敏感性约50%-80%。但mNGS成本高、结果解读复杂，需结合MTB序列数、覆盖深度及临床特征综合判断，共识建议其作为疑难病例的补充检测手段。