CN116426453A 一种高产莫匹罗星的荧光假单胞菌基因工程菌株及制作方法 （广西大学）.docxVIP

(19)国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN116426453A(43)申请公布日2023.07.14

(21)申请号202310517175.9

(22)申请日2023.05.09

(71)申请人广西大学

地址530004广西壮族自治区南宁市大学

东路100号

(72)发明人吴小刚张博尚睿婧于小喻

(74)专利代理机构新余市渝星知识产权代理事务所(普通合伙)36124

专利代理师张瑜生

(51)Int.CI.

C12N1/21(2006.01)

C12N15/54(2006.01)

C12N15/31(2006.01)

C12N15/78(2006.01)

C12P17/16(2006.01)

C12R1/39(2006.01)

权利要求书2页说明书6页序列表(电子公布)附图3页

(54)发明名称

一种高产莫匹罗星的荧光假单胞菌基因工程菌株及制作方法

(57)摘要

莫匹罗星浓度(mg/mL)本发明提供一种高产莫匹罗星的荧光假单胞菌基因工程菌株及制作方法，该基因工程菌株是通过敲除荧光假单胞菌2P24中spoT、relA、mvaT和rsaL基因后而获得，它可使莫匹罗星的发酵产量由3mg/mL提升到了15mg/mL,为降低莫匹罗星的生产成本提供了坚实基础。

莫匹罗星浓度(mg/mL)

CN

CN116426453A

CN116426453A权利要求书1/2页

2

1.一种高产莫匹罗星的荧光假单胞菌基因工程菌株，其特征在于，具体是敲除荧光假单胞菌(Pseudomonasfluorescens)2P24基因组中的spoT基因、relA基因、mvaT基因和rsaL基因，所得到的荧光假单胞菌基因工程菌株2P24△ATTL。

2.一种如权利要求1所述的高产莫匹罗星的荧光假单胞菌基因工程菌株的制作方法，其特征在于，以具有高产莫匹罗星的荧光假单胞菌(Pseudomonasfluorescens)2P24为出发菌株，利用基因重组技术分别敲除2P24基因组中的spoT基因、relA基因、mvaT基因和rsaL基因，得到高产莫匹罗星的荧光假单胞菌基因工程菌株2P24△ATTL。

3.如权利要求2所述的制作方法，其特征在于，spoT基因的具体敲除方式如下：

1)扩增spoT基因上下游片段，通过融合PCR法将spoT基因上下游片段连接并克隆到p2P24Km自杀质粒中，得到spoT基因重组质粒p2P24-spoT;

2)通过电击转化将p2P24-spoT导入荧光假单胞菌2P24中；

3)通过蔗糖平板筛选、PCR筛选共同筛选得到工程菌株2P24△spoT。

4.如权利要求3所述的制作方法，其特征在于，spoT基因的序列如SEQIDNO.1所示；

扩增spoT基因上游片段的引物包括spoT-F1和spoT-R1,序列分别如SEQIDNO.2和SEQ

IDNO.3所示；

扩增spoT基因下游片段的引物包括spoT-F2和spoT-R2,序列分别如SEQIDNO.4和SEQIDNO.5所示；

采用融合PCR法获得spoT基因上下游融合片段序列如SEQIDNO.6所示。

5.如权利要求2所述的制作方法，其特征在于，relA基因的具体敲除方式如下：

1)扩增relA基因上下游片段，通过融合PCR法将relA基因上下游片段连接并克隆到p2P24Km自杀质粒中，得到relA基因重组质粒p2P24-relA;

2)通过电击转化将p2P24-relA导入荧光假单胞菌2P24△spoT中；

3)通过蔗糖平板筛选、PCR筛选共同筛选得到工程菌株2P24△spoT△relA。

6.如权利要求5所述的制作方法，其特征在于，relA基因的序列如SEQIDNO.7所示；

扩增relA基因上游片段的引物包括relA-F1和relA-R1,序列分别如SEQIDNO.8和SEQ

IDNO.9所示；

扩增relA基因下游片段的引物包括relA-F2和relA-R2,序列分别如SEQIDNO.10和SEQIDNO.11所示；

采用融合PCR法获得relA基因上下游融合片段序列如SEQIDNO.12所示。