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使用中消毒剂染菌量监测标准操作规程

一、适用范围

本规程适用于医疗机构、疾控中心、实验室及其他使用场景中，处于使用状态的中效消毒剂（包括但不限于含氯消毒剂、过氧乙酸、双链季铵盐类消毒剂等）染菌量的日常监测与质量控制。监测对象为未启封但已稀释使用的消毒剂、启封后连续使用的消毒剂及更换周期内的消毒剂溶液，不适用于未使用的原药原液及已明确废弃的消毒剂。

二、术语定义

1.使用中消毒剂：指已启封或稀释后，处于临床、实验或环境消毒操作过程中，尚未超过规定使用期限的消毒剂溶液。

2.染菌量：单位体积（mL）使用中消毒剂溶液内污染的需氧菌、真菌等微生物菌落总数（CFU/mL），不包括消毒剂本身含有的有效成分杀灭的微生物。

三、监测前准备

（一）人员要求

监测人员需经过微生物检测技术培训，掌握无菌操作规范、培养基制备及菌落计数方法，熟悉《消毒技术规范》（WS/T628-2018）等相关标准。操作时需穿戴无菌工作服、口罩、手套，必要时在生物安全柜内进行。

（二）仪器与设备

1.采样工具：1mL、5mL无菌吸管（带棉塞）或无菌注射器（20mL），使用前需经121℃高压蒸汽灭菌30分钟，冷却后置于无菌包装内备用。

2.培养器材：90mm无菌培养皿（玻璃或塑料材质），需经121℃高压蒸汽灭菌30分钟；刻度吸管（1mL、10mL）、试管（15mm×150mm）等均需灭菌处理。

3.培养设备：恒温培养箱（温度范围20-45℃，精度±1℃）、真菌培养箱（温度范围20-30℃，精度±1℃），使用前需校准温度均匀性，确保各层温差≤1℃。

4.其他设备：漩涡振荡器（用于样品与中和剂混合）、电子天平（精度0.01g）、pH计（用于中和剂溶液pH校准）。

（三）试剂与材料

1.培养基：需使用符合国家标准的商品化培养基或自配培养基。细菌检测使用营养琼脂培养基（成分：蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化钠5g、琼脂15g、蒸馏水1000mL，pH7.2-7.4）；真菌检测使用沙氏葡萄糖琼脂培养基（成分：蛋白胨10g、葡萄糖40g、琼脂15g、蒸馏水1000mL，pH5.6±0.2）。培养基需经121℃高压蒸汽灭菌15分钟，冷却至45-50℃时倾注平板，凝固后置于4℃冰箱保存（不超过7天）。

2.中和剂溶液：根据消毒剂类型选择中和剂，需通过中和剂鉴定试验验证有效性（具体方法见附录A）。常见中和剂组合如下：

-含氯消毒剂：0.1%硫代硫酸钠溶液（pH7.0-7.2）；

-过氧乙酸：0.1%亚硫酸钠溶液；

-季铵盐类消毒剂：3%吐温-80+0.3%卵磷脂溶液；

-复合消毒剂：需根据有效成分组合选择复合中和剂（如含氯+季铵盐类消毒剂使用0.1%硫代硫酸钠+3%吐温-80+0.3%卵磷脂溶液）。

中和剂溶液需经121℃高压蒸汽灭菌15分钟，冷却后4℃保存（不超过3天）。

四、监测操作流程

（一）采样

1.采样时机：

-连续使用的消毒剂：每日常规监测应在更换周期中点（如规定使用48小时，于第24小时采样）及使用结束前（第48小时）各采样1次；

-新配制的稀释液：配制完成后30分钟内采样（避免未完全溶解的有效成分影响结果）；

-怀疑污染时：立即采样检测。

2.采样方法：

-容器内采样：若消毒剂盛放于带盖容器（如治疗碗、喷壶），采样前用75%乙醇擦拭容器外壁及盖内面，待干后打开，用无菌吸管从液面下2-5cm处（中上部）吸取1mL溶液，缓慢注入无菌试管（避免气泡）；

-流动状态采样：若消毒剂通过管道或泵持续输送（如自动清洗机），需先排空管道内残留液5-10mL，再用无菌容器接取10mL溶液，从中吸取1mL作为检测样品。

3.采样量：每批次消毒剂至少采集2份平行样品（每份1mL），1份用于检测，1份用于复检。

（二）样品处理

1.中和反应：将1mL样品加入含9mL中和剂溶液的试管中（样品与中和剂比例1:9），漩涡振荡30秒，室温静置30分钟（确保中和剂与消毒剂有效成分充分反应）。若消毒剂浓度较高（如含氯消毒剂浓度＞5000mg/L），需先进行10倍梯度稀释（用无菌生理盐水），再加入中和剂（如1mL样品+9mL生理盐水→取1mL稀释液+9mL中和剂）。

2.梯度稀释：若初步估计染菌量较高（如溶液浑浊、有沉淀），需将中和后的样品进行10倍系列稀释（如10?1、10?2、10?3），每个稀释度取1mL用于接种。

（三）接种与培养

1.细菌检测：取中和后的样品（或稀释液）1mL注入无菌培养皿，立即倾注45-50℃的营养琼脂培养基约15mL，轻轻