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微生物的培养技术及应用（三）

学习目标

1．掌握微生物选择培养的原理，能够根据要求设计选择培养基的配方；

2．掌握微生物计数的方法，总结不同计数方法原理的异同。

学习过程

【新课导入】

1973年，科学家从美国黄石国家公园的热泉中筛选出水生栖热菌，进而从这种菌中提取出耐高温的DNA聚合酶。这种酶目前已被广泛用于体外扩增DNA片段的聚合酶链式反应（PCR）。

思考1：为什么水生栖热菌能从热泉中被筛选出来呢？

思考2：实验室筛选微生物的原理是什么？

【新知讲解】

内容一：选择培养基

1．在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时或其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。

2．选择培养基配方的设计

尿素[CO(NH2)2]含氮量高，化学性质相对稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素施入土壤后，

会被土壤中的某些细菌分解成NH3，NH3再转化为NOEQ\*jc3\*hps14\o\al(\s\up4(_),3)、NHEQ\*jc3\*hps14\o\al(\s\up4(+),4)等被植物吸收。而这些细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可作为细菌生长的氮源。

思考1：如果配制一种将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来的培养基，该培养基的配方该如何设计？

思考2：该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？

【学以致用】

例1：下表是某同学设计的一种培养基配方，下列有关分析正确的是()

成分

含量

成分

含量

硝酸钠

3g

无水碳酸钠

1g

硫酸镁

0.5g

磷酸二氢钠

0.25g

硫酸锰

0.01g

蒸馏水

1000mL

磷酸氢二钾

0.75g

琼脂

15g

A．该培养基中不含碳源，不能用于培养任何微生物

B．此配方制作固体培养基，可用于选择培养异养的固氮微生物

C．若需筛选耐酸的微生物，需要培养基灭菌后通过滴加盐酸来调节pH

D．若需筛选分解尿素的细菌，需去除硝酸钠，添加尿素和葡萄糖

内容二：微生物的选择培养

稀释涂布平板法的具体步骤（以筛选土壤中的尿素分解菌为例）：

①铲取土样，将样品装入纸袋中。

②将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。

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③取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。

④将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。

⑤将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。

⑥用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。

待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板，放入30~37。C的恒温培养箱中培养1~2d。在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的。

内容三：微生物的数量测定

1．稀释涂布平板法

（1）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

（2）计数公式：每克样品中的活菌数=某一稀释度下平板上生长的平均菌落数÷涂布平板时所用的稀释液的体积（mL）x稀释倍数

（3）注意事项

①为了保证结果准确，一般选择菌落数为的平板进行计数。

②在同一稀释度下，应至少对个平板进行重复计数，然后求出平均值。

③统计的菌落数往往比活菌的实际数目，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用数而不是用活菌数来表示。

2．显微镜直接计数

（1）原理：利用特定的或，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量。

（2）特点

①快速、直观；

②统计的结果一般是和的总和。

思考：平板划线法可否用于微生物的计数？

【学以致用】

例2：从自然界中筛选具有优良性状的菌种的一般步骤为：采集样品→富集培养（使菌体数量增多）→纯种分离→性能测定，如图a、b是采用两种接种方法接种后纯化培养的效果图。下列相关叙述正确的是()

A．a和b中都是固体培养基，都添加了琼脂

B．为获得纯种的目的菌种，需对采集的样品进行灭菌

C．获得图a结果的接种过程中，接种环需灼烧3次

D．图b所示的平板中菌落数能准确计算出样品中菌体浓度

【课堂小结】

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学习过程答案

【学以致用】

例1：【答案】D

例2：【答案】A

一、单选题（本题共4小题）

1．