生物药物概论课件.pptVIP

*曲妥珠單抗是一種重組DNA衍生的人源化單克隆抗體，選擇性地作用於人表皮生長因數受體-2(HER2)的細胞外部位。此抗體屬IgGl型，含人的框架區，及能與HER-2結合的鼠抗-p185?HER2抗體的互補決定區。

人源化的抗HER2抗體是由懸養於無菌培養基中的哺乳動物細胞(中國倉鼠卵巢細胞CHO)產生的，用親合色譜法和離子交換法純化，包括特殊的病毒滅活的去除程式。

HER2原癌基因或C-erbB2編碼一個單一的受體樣跨膜蛋白，分子量185kDa，其結構上與表皮生長因數受體相關。在原發性乳腺癌患者中觀察到有25%-30%的患者HER2過度表達。HER2基因擴增的結果是這些腫瘤細胞表面HER2蛋白表達增加，導致HER2受體活化。**RNAi對輔修班不做要求siRNA是一種能用於沉默基因關閉有害蛋白製造的偉大技術。鑒於siRNA在哺乳動物細胞上抑制基因表達的卓越性能,利用siRNA開發抗腫瘤、抗病毒等藥物的工作也已經開始,已有臨床實驗。**SmallinterferingRNA(siRNA)：是一種小RNA分子（~21-25核苷酸），由Dicer（RNAaseⅢ家族中對雙鏈RNA具有特異性的酶）加工而成。SiRNA是siRISC的主要成員，激發與之互補的目標mRNA的沉默。

siRNA原理:

RNA干涉（RNAi）在實驗室中是一種強大的實驗工具，利用具有同源性的雙鏈RNA（dsRNA）誘導序列特異的目標基因的沉寂，迅速阻斷基因活性。siRNA在RNA沉寂通道中起中心作用，是對特定信使RNA（mRNA）進行降解的指導要素。siRNA是RNAi途徑中的中間產物，是RNAi發揮效應所必需的因數。siRNA的形成主要由Dicer和Rde-1調控完成。由於RNA病毒入侵、轉座子轉錄、基因組中反向重複序列轉錄等原因,細胞中出現了dsRNA，Rde-1(RNAi缺陷基因-1)編碼的蛋白質識別外源dsRNA，當dsRNA達到一定量的時候，Rde-1引導dsRNA與Rde-1編碼的Dicer（Dicer是一種RNaseIII活性核酸內切酶，具有四個結構域：Argonaute家族的PAZ結構域，III型RNA酶活性區域，dsRNA結合區域以及DEAH/DEXHRNA解旋酶活性區）結合，形成酶-dsRNA複合體。在Dicer酶的作用下，細胞中的單鏈靶mRNA（與dsRNA具有同源序列）與dsRNA的正義鏈互換，原來dsRNA中的正義鏈被mRNA代替而從酶-dsRNA複合物中釋放出來，然後，在ATP的參與下，細胞中存在的一種RNA誘導的沉默複合體RNA-inducedsilencingcomplex（RISC，由核酸內切酶、核酸外切酶、解旋酶等構成，作用是對靶mRNA進行識別和切割）利用結合在其上的核酸內切酶的活性來切割dsRNA上處於原來正義鏈位置的靶mRNA分子中與dsRNA反義鏈互補的區域，形成21-23nt的dsRNA小片段，這些小片段即為siRNA。RNAi干涉的關鍵步驟是組裝RISC和合成介導特異性反應的siRNA蛋白。siRNA併入RISC中，然後與靶標基因編碼區或UTR區完全配對，降解靶標基因，因此說siRNA只降解與其序列互補配對的mRNA。其調控的機制是通過互補配對而沉默相應靶位基因的表達，所以是一種典型的負調控機制。siRNA識別靶序列是有高度特異性的，因為降解首先在相對於siRNA來說的中央位置發生，所以這些中央的堿基位點就顯得極為重要，一旦發生錯配就會嚴重抑制RNAi的效應。

siRNA有如下特點：

1.長度約在22nt左右。

2.依賴Dicer酶的加工，是Dicer的產物，所以具有Dicer產物的特點。

3.生成需要Argonaute家族蛋白存在。

4.是RISC組分。

5.siRNA合成是由雙鏈的RNA或RNA前體形成的。

6.siRNA是人工體外合成的，通過轉染進入人體內，是RNA干涉的中間產物。

7.結構上，siRNA是雙鏈RNA。

8.在Dicer酶的加工過程中，siRNA對稱地來源於雙鏈RNA的前體的兩側臂。

9.在作用位置上，siRNA可作用於mRNA的任何部位。

10.在作用方式上，siRNA只能導致靶標基因的降解，即為轉錄水準後調控。

11.siRNA不參與生物生長，是RNAi的產物，原始作用是抑制轉座子活性和病毒感染。

*基因疫苗（geneticvaccine）又稱核酸疫苗(nucleicacidvaccine)或DNA疫苗，是指將編碼外源性抗原的基因插入到含真核表達系統的載體上，然後直接導入人或動物體內，讓其在宿主細胞中表達抗原蛋白，該抗原蛋白可直接誘導機體產生免疫應答。生物藥物概論

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