基因工程的基本操作程序——高中生物人教版选择性必修3第三章 2.docxVIP

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基因工程的基本操作程序

学习目标

1．说出基因表达载体的组成和结构；

2．阐明构建基因表达载体的过程。

学习过程

【新课导入】

获取了足够量的Bt基因后，还需要将其导入棉花细胞，并且让Bt基因在棉花细胞中正常表达出Bt抗虫蛋白，转基因棉花才能具有抗虫特性。如何才能让Bt基因这种外源基因在棉花细胞中稳定存在并表达呢？

【新知讲解】

内容一：基因表达载体

1．基因表达载体的作用

（1）使目的基因在受体细胞中_________，并且遗传给下一代。

（2）使目的基因能够_______和发挥作用。

2．基因表达载体的组成

基因表达载体是载体的一种，除_________基因、_________基因外，它还必须有_________、_________等。

（1）启动子是一段有特殊序列结构的_________片段，位于基因的_________，紧挨_________的起始位点，它是_________酶_________和_________的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终表达出人类需要的蛋白质。有时为了满足应用需要，会在载体中人工构建_________启动子，当诱导物存在时，可以________或_________目的基因的表达。

（2）终止子位于基因的_________，也是一段有特殊序列结构的_________片段，可以终止_________过程。思考：启动子、终止子和起始密码子、终止密码子有什么区别？

【学以致用】

例1：酵母人工染色体pYAC2是以酵母菌为受体细胞构建基因文库时的常用载体。下图为pYAC2的结构示意图，导入受体细胞前用限制酶BamHⅠ切割可使其成为线性的染色体。pYAC2适配的受体菌菌落呈红色，sup4基因表达能够抑制其性状表现，使菌落呈白色。相关叙述错误的是()

A．导入pYAC2的受体菌能够在不含色氨酸的培养基中生存

B．用BamHⅠ切割pYAC2后，TEL端粒序列位于染色体的两端

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C．着丝粒序列CEN4的存在可防止pYAC2在细胞分裂中丢失

D．将带有目的基因的重组pYAC2导入受体菌后应挑选白色菌落

内容二：基因表达载体的构建

1．基因工程的核心步骤是________________________。

2．构建基因表达载体的过程

（1）用一定的_________酶切割载体，使它出现一个切口；

（2）用_______限制酶或能产生_________的限制酶切割___________________________；

（3）用_________酶将目的基因片段拼接到载体的切口处，形成了__________________分子。

3．构建基因表达载体时，为保证目的基因与质粒_______连接，可采用两种能产生______末端的限制酶。

【学以致用】

例2：家禽的饲料中富含谷物，纤维素是谷物的重要成分，但家禽消化道中缺少能降解纤维素的酶，阻碍了家禽对饲料的吸收与利用。研究人员利用转基因技术改造乳酸杆菌，将其添加到饲料中，以提高家禽养殖效率。枯草芽孢杆菌的W基因可编码一种可高效降解纤维素的酶，已知图中W基因转录方向是从左往右。为使乳酸杆菌产生该酶，以图中质粒为载体进行转基因操作，下列说法不正确的是()

限制酶

BamHⅠ

EcoRⅠ

MfeⅠ

KpnⅠ

HindⅢ

识别序列和切割位点

（5,→3,）

G↓GATTC

G↓AATTC

C↓AATTG

GGTAC↓C

A↓AGCTT

A．家禽肠道内乳酸杆菌细胞呼吸产生的物质可抑制某些微生物生长

B．限制酶主要是从原核生物中分离纯化出来，种类繁多且具有专一性

C．在受体细胞中，W基因转录时以乙链为模板，可以边转录边翻译

D．为获得正确表达W基因的重组质粒，应选HindⅢ和EcoRⅠ切割质粒【课堂小结】

学习过程答案

【学以致用】

例1：【答案】D

例2：【答案】D

一、单选题（本题共4小题）

1．如图为基因表达载体模式图，下列有关叙述正确的是()

A．甲表示启动子，位于基因的上游，它是DNA聚合酶识别和结合的位点

B．乙表示终止密码子，位于基因的下游，作用是使转录过程停止

C．丙表示目的基因，其作用是获取人们需要的性状

D．复制原点的存在有利于目的基因在宿主细胞内扩增【答案】D

【解析】A．甲表示启动子，位于基因的上游，它是RNA聚合酶识别和结合的位点，A错误；

B．乙表示终止子，不是终止密码子，位于基因的下游，作用是使转录过程停止，B错误；

C．丙表示抗性基因，其作用是筛选含有重组质粒的受体细胞，C错误；

D．基因表达载体包括复制