基因工程的基本操作程序——高中生物人教版选择性必修3第三章 1.docxVIP

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基因工程的基本操作程序

学习目标

1．举例说明筛选和获取目的基因的常用方法。

2．阐明PCR技术的原理和过程。

学习过程

【新课导入】

棉铃虫是棉花的主要害虫，可以使棉花产量减少三分之一，严重时，甚至能使一片棉田绝收。大量施用农药杀虫不仅会提高生产成本，还可能造成农产品和环境的污染。1997年，我国政府首次批准商业化种植转基因抗虫棉。到2015年，我国已育成转基因抗虫棉新品种100多个，减少农药用量40万吨，增收节支社会经济效益450亿元。科学家是如何培育转基因抗虫棉的呢？

【新知讲解】

内容一：目的基因的筛选与获取

1．基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤：________________________、________________________、

__________________________、________________________________。

2．筛选合适的目的基因

苏云金杆菌通过产生苏云金杆菌伴孢晶体蛋白（Bt抗虫蛋白），破坏鳞翅目昆虫的消化系统来杀死棉铃虫。科学家通过实验，将该细菌的“杀虫基因”转到棉花里，让棉花也能产生Bt抗虫蛋白抵抗虫害。这个“杀虫基因”就是培育转基因抗虫棉用到的目的基因——Bt抗虫蛋白基因，简称Bt基因。

从相关的已知结构和功能清晰的基因中进行筛选是较为有效的方法之一。随着测序技术的发展，以及序列数据库（如GenBank）、序列比对工具（如BLAST）等的应用，越来越多的基因的结构和功能为人们所知，这也为科学家找到合适的目的基因提供了更多的机会和可能。

3．利用PCR获取和扩增目的基因

（1）获取目的基因的方法有多种。在我国首批具有较高抗虫活性的转基因抗虫棉的培育过程中，科学家__________了目的基因。

（2）现在常用PCR特异性地快速扩增目的基因。PCR是聚合酶链式反应的缩写，它是一项根据___________________的原理，在______提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。

（3）反应体系：

①一定的缓冲液。PCR反应缓冲液中一般要添加______，其作用是___________________。

②DNA_____。

③分别与两条模板链结合的2种______，即一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的____________。用于PCR的引物长度通常为20~30个核苷酸。

④4种______________。

⑤_______的___________酶。

（4）过程：每次循环分为______、______和______三步。

①变性：当温度超过90℃时，双链DNA解聚为单链。

②复性：当温度下降到50℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。

③延伸：当温度上升到72℃左右时，以单链DNA为模板，在耐高温的DNA聚合酶作用下，4种脱氧核苷酸加到引物的39端，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。

（5）由于延伸后得到的产物又可以作为下一个循环的模板，因而每一次循环后目的基因的量可以增加一倍，即成指数形式扩增（约为______，其中n为扩增循环的次数）。

（6）PCR过程可以在____________（PCR仪）中自动完成。PCR利用了DNA的_________原理，通过调节_________来控制DNA双链的解聚与结合。PCR仪实质上就是一台能够自动调控温度的仪器。

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（7）PCR完成以后，常采用____________来鉴定PCR的产物。DNA分子具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团可以带上正电荷或负电荷。在电场的作用下，这些带电分子会向着与它所带电荷_______的电极移动，这个过程就是电泳。在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的______和______等有关。凝胶中的DNA分子通过染色，可以在波长为300nm的紫外灯下被检测出来。

思考：用PCR可以扩增mRNA吗？

4．PCR与DNA复制的比较

项目

DNA复制

PCR技术

区别

解旋方式

______催化

DNA在______作用下变性解旋

场所

细胞内（主要在______内）

体外（主要在PCR仪内）

酶

解旋酶、_________酶

耐高温的DNA聚合酶

温度条件

细胞内温和条件

需控制温度，在较高温度下进行

合成的对象

DNA分子

DNA片段或基因

联系

均需要_______、_________、_________和DNA聚合酶

【学以致用】

例：棉蚜体内有多种寄生蜂