【毕业论文】凡纳滨对虾血蓝蛋白凝集活性的研究.docVIP

【标题】凡纳滨对虾血蓝蛋白凝集活性的研究 【作者】杨 伟 【关键词】凡纳滨对虾??血蓝蛋白??凝集活性??柱层析??电泳 【指导老师】邢 立 刚 【专业】生物科学 【正文】目?????录目?????录 01.前言 11.1?凡纳滨对虾 11.2?血蓝蛋白 11.3?课题目的 11.4?课题意义 11.5?国内外研究情况 22.?材料和方法 22.1?实验材料 22.2?实验方法 33.?结果与分析 63.1?血蓝蛋白分离、纯化与鉴定 63.2?浓度的测定 73.4?血蓝蛋白凝集活性的研究 74.?讨论 7致?????谢 9参考文献 101??前言1.1?凡纳滨对虾凡纳滨对虾（L. vannamei）亦称为南美白对虾，原产于美洲太平洋沿岸水域，主要分布秘鲁北部至墨西哥湾沿岸，以厄瓜多尔沿岸分布最为集中；目前已成为我国主要养殖品种，其产量占对虾养殖总产量的70%以上。1.2?血蓝蛋白血蓝蛋白（hemocyanin）是位于甲壳动物血淋巴中的含铜呼吸蛋白，脱氧状态为无色，氧合状态为蓝色。一般认为血蓝蛋白的主要生物学功能与机体内的输氧有关。但近年来的研究表明，血蓝蛋白是一种多功能蛋白，不仅有输氧功能，而且还与能量的贮存、渗透压的维持以及蜕皮的过程的调节、表皮的固化，以及黑色素的合成有关[1~3]。特别引起学术界重视的是，血蓝蛋白还具有酚氧化物酶活性、抗菌和抗病毒等功能[4~5]，被认为是甲壳动物中一种相当重要的免疫分子。同时国内学者研究表明[6]，血蓝蛋白对细菌具有凝集活性。1.3?课题目的一般认为对虾以非特异性免疫为主，不具备特异性免疫系统。但目前研究已在对虾中发现了一些重要的免疫因子如酚氧化酶原?(pro PO)激活系统、凝集素、抗菌肽等。其中酚氧化酶原激活系统激活后产生的黑色素及其中间产物?，可通过多种方式参与宿主防御反应，包括提供调理素，促进血细胞吞噬作用、包囊作用和结节的形成，介导凝集和凝固，产生杀菌物质等，是对虾中一类相当重要的免疫防御分子[7]。据章跃陵等人[8]研究，推测凡纳滨对虾血蓝蛋白对细菌确实具有凝集活性。本研究在前人研究的基础上，进一步验证凡纳滨对虾血蓝蛋白对细菌的凝集活性，同时探究不同组分血蓝蛋白对金黄色葡萄球菌的凝集是否具有差异性及其凝集活性大小的对比。1.4?课题意义我国是水产养殖大国，对虾是海产品中高产值养殖对象。然而目前我国对虾养殖业尚存在养殖风险大、生产成本高和生产效益低等缺陷。其原因，主要与目前人们对对虾病害特别是病毒性病、细菌性病和交叉感染综合征等尚无特殊的生态学治疗方法有关。鉴于此，学术界普遍认为，研究对虾自身免疫抗病机制，寻找“以防为主”的生态学防治方法，是解决目前对虾养殖疾病的有效途径[9]。尤其是随着近年来人们对非特异性免疫系统研究的不断深入，发现其与特异性免疫系统具有同等重要的地位。虽然目前在对虾中相继发现了一些与免疫有关的免疫因子，如酚氧化酶原激活系统、凝集素、抗菌肽、溶菌酶、溶血素、蛋白酶抑制剂等，但迄今为止，对虾大部分防御系统及其作用机理尚不清楚，还有待解决。本研究以凡纳滨对虾血蓝蛋白为有研究对象，在验证凡纳滨对虾血蓝蛋白对细菌的凝集活性的同时探究不同组分血蓝蛋白对金黄色葡萄球菌的凝集是否具有差异性及其凝集活性大小的对比，以进一步对其免疫学功能进行分析，为丰富虾类免疫系统研究，探索对虾疾病免疫学防治奠定基础。1.5?国内外研究情况1.5.1?国内研究情况国内对血蓝蛋白的研究主要表现在血蓝蛋白的载氧功能、血蓝蛋白的抗病毒作用、血蓝蛋白的血凝作用、血蓝蛋白的抗菌作用等方面。探索这些结果表明，血蓝蛋白在低浓度时是潜在的病毒抑制物，但血蓝蛋白不能完全抑制病毒的复制；血蓝蛋白的两个亚基在免疫功能上有很大差异；血蓝蛋白确实具有血细胞凝集活性。虽然，已经有较多学者开始注意血蓝蛋白的功能，但是，血蓝蛋白的功能特别是血蓝蛋白的免疫防御功能是近年来无脊椎动物免疫学领域的最新发现，在免疫反应中，仅可表现出酚氧化酶的功能。对于血蓝蛋白的其免疫机理目前尚不十分明确，因此进行深入细致的研究，搞清楚其免疫机制，对于甲壳类经济动物的疾病控制是至关重要的。1.5.2国外研究情况近年来，随着血蓝蛋白多种功能的不断发现，特别是免疫活性的发现，血蓝蛋白的功能、作用机理、进化地位已经引起各国学者的浓厚兴趣。进一步研究血蓝蛋白功能对于丰富和发展无脊椎动物，特别是甲壳类动物生理生化和免疫系统的基础研究有重要作用。探索这些免疫功能结果表明，血蓝蛋白具有广谱抗细菌、真菌、病毒功能及独特的作用机理，有可能成为抗菌、抗病毒及抗肿瘤药物的新来源。2.?材料和方法2.1?实验材料2.1.1?实验材料凡纳滨对虾（L.