高背景下检测稀有致病菌O157的琼脂糖液滴微流控PCR技术.docVIP

  高背景下检测稀有致病菌 O157 的琼脂糖液 滴微流控 PCR 技术# 张明霞，张文华，冷雪飞，朱志，杨朝勇** 5 10 15 20 25 30 35 （厦门大学化学化工学院化学生物学系，厦门 福建 361005） 摘要：近期全球范围食物中致病菌感染引起的中毒事件频繁发生。为了能确定疾病暴发的源 头和确保公共安全，建立一种在大量非致病菌背景下快速检测致病菌的高灵敏方法极其迫 切。传统的检测方法，例如细胞培养法，需要消耗大量的时间、试剂和人力物力但检测灵敏 度又很低。针对这些问题，本工作发展了一种能在高浓度的非致病菌背景下定量灵敏检测稀 有致病菌的方法。该方法结合高通量琼脂糖液滴微流控技术、数字 PCR 以及流式细胞术， 具有快速、高灵敏、定量检测的优点。 关键词：化学生物学；微流控液滴；数字 PCR；单细胞分析；致病菌检测 中图分类号：O652.6 Detection of E. Coli O157 in the High Background through Agarose Droplet Microfluidics PCR ZHANG Mingxia, ZHANG Wenhua, LENG Xuefei, ZHU Zhi, YANG James Chaoyong (College of Chemistry and Chemical Engineering, Xiamen University, Xiamen, Fujian, 361005) Abstract: E.coli O157:H7 infectious disease is associated with numerous serious foodborne outbreaks in recent years. Rapid methods to detect E.coli O157:H7 are important to identify the source of outbreaks and to assure public safety. However, traditional methods that base on bacteria culture are often time-consuming, laborious and expensive with low sensitivity. Herein, we developed an approach that combine the agarose droplets microfluidics, digital PCR, with high-throughput flow cytometry technique to allow the highly sensitive detection of pathogenic bacteria in a quantitative manner from a background of nonpathogenic bacteria. Key words: Chemical biology; Microfluidic droplet; Digital PCR; Single cell analysis; bacteria detection 0 引言 肠杆菌科是由多个菌属组成，生物学性状相似，寄居在人和动物的消化道内。虽然绝大 多数菌种都是无害的，但少部分肠杆菌却是严重的致病菌。例如，肠出血性大肠杆菌（EHEC） O157:H7, 低至 100 个细胞的感染量足以导致出血性腹泻和肠炎等疾病的发生甚至死亡[1, 2]。 近期全球范围食物中致病菌感染引起的中毒事件频繁发生。仅因大肠杆菌 O157:H7 感染的 病人，每年全美就高达 2 万多例，其中导致死亡的人数有 200～500 人[3]。因而，发展致病 菌的快速高灵敏检测方法极为迫切。 以细菌培养、稀释涂布于特异性培养板上检测的常规方法是目前国内绝大多数检测机构 都在使用的方法[4]，由于其检测周期长、程序复杂、所需试剂繁多等缺点已远远不能满足现 代检测要求。而且这种传统的微生物学方法需要基于对大量细菌的形貌和生长进行观测，常 基金项目：教育部高校博士点基金（200803841013) 作者简介：张明霞，女，本科生，主要研究方向：微流控技术 通信联系人：杨朝勇，男，教授，主要研究方向：微流控技术，DNA 分子工程，化学生物学. E-mail: cyyang@xmu.edu.cn -1-   40 45 50 55 60 65 70 75  常忽略了单细胞间的区别[5]，难以满足高浓度的非致病菌背景下对少量致病菌的检测的需 求。建立高背景下稀有致病菌的高灵敏、快速检测方法在疾病诊断、食品分析