0300 细胞培养的基本方法.pptVIP

裸小鼠（nude mice）：T淋巴细胞功能缺陷动物 即先天性无胸腺裸小鼠，由11号染色体上nu隐性基因突变导致。 被毛生长异常，呈裸体外表。 无胸腺，仅有胸腺残迹或异常胸腺上皮，不能使T-cell正常分化，导致细胞免疫力低下。幼龄鼠有残存的未分化的上皮细胞。 B细胞功能正常，NK细胞活力增强。 繁育能力差，乳腺发育缺损，以雄性纯合子与雌性杂合子繁育。 T细胞缺陷可通过移植成熟T细胞、胸腺细胞或正常胸腺上皮得到校正。 Summary 细胞培养操作中如何避免污染？ 各种污染的鉴定和处理？ 培养细胞死活的鉴定方法？ 培养细胞的观察方法和增殖活力的测定方法？ 平板克隆形成试验方法简单，适用于贴壁生长的细胞。适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿。试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞一定要分散得好，不能有细胞团，接种密度不能过大。 软琼脂培养克隆形成试验 基本步骤： (1)取对数生长期细胞，用0.25%胰蛋白酶消化并轻轻吹打，使之成为单细胞，作活细胞计数，用含20%胎牛血清的DMEM培养液调整细胞密度至1×106细胞/L。然后根据实验要求作梯度倍数稀释。 (2)用蒸馏水分别制备出1.2%和0.7%两个浓度的低溶点琼脂糖液，高压灭菌后，维持在40℃中不会凝固。 (3)按1:1比例使1.2%的琼脂糖和2×DMEM培养基(含有2×抗生素和20%的小牛血清)混合后，取3mL混合液注入直径