结核分枝杆菌Rel酶相互作用蛋白的筛选.docVIP

  结核分枝杆菌 Rel 酶相互作用蛋白的筛选# 张华* （华中农业大学生命科学技术学院，武汉，430070） 5 10 摘要：目的：从结核分枝杆菌全基因组序列中筛选能与结核分枝杆菌 RelMTB 有相互作用的 蛋白，发掘新的 RelMTB 蛋白的活性调控方式；方法：主要采用分子克隆技术克隆了 pBT-relMTB 质粒，并利用细菌双杂交技术筛选与结核分枝杆菌 RelMTB 有相互作用的蛋白； 结果：测序分析表明 relMTB 基因被正确的克隆到 pBT 载体上，经过细菌双杂交筛选发现 47 个能与结核分枝杆菌 RelMTB 有相互作用的蛋白；结论：筛选得到的结核分枝杆菌 RelMTB 的相互作用蛋白提示 RelMTB 可能具有新的活性调控方式，即通过蛋白质-蛋白质 相互作用的方式进行调控。 关键词：微生物；结核分枝杆菌；Rel；鸟苷五（四）磷酸 中图分类号：Q93 15 Screening of proteins interacting with Mycobacterium tuberculosis Rel Zhang Hua (College of life science and technology,Huazhong Agricultural University,Wuhan,430070) 20 25 Abstract: In this paper, the aims were to screen the proteins interacting with Mycobacterium tuberculosis RelMTB from M. tuberculosis whole genome, and explore its new activity regulation mechanism. Methods: Molecular cloning techniques were used to clone plasmid pBT-relMTB, and Bacterial Two-Hybrid system was applied to screen the interaction proteins of RelMTB. Results: relMTB gene was correctly cloned to vector pBT from sequencing analysis, and 47 proteins were found to interact with M. tuberculosis RelMTB through Bacterial Two-Hybrid technique. Conclusion: Interaction proteins screened from M. tuberculosis whole genome suggest that the activity of RelMTB must be a new regulation mechanism, that is protein-protein interaction. Key words: Microbiology; Mycobacterium tuberculosis; Rel; (p)ppGpp 30 0 引言 结核病是目前全球最主要的流行病之一，每年因结核病死亡的人数近 300 万，并且伴随 着艾滋病的流行而呈现恶化趋势[1, 2]。结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）是人结核 病的主要致病菌，通过呼吸传染。人体免疫系统以及治疗药物可以清除大部分侵入人体的结 35 40 核菌，但仍有少部分菌能在体内不利环境下潜伏存活。条件合适时，这些潜伏在人体内的结 核菌重新被激活，使人致病[3, 4]。当前结核分枝杆菌的潜伏机制以及激活机制仍不清楚，因 此影响了结核病治疗药物的开发。 鸟苷五(四)磷酸((p)ppGpp)是细菌在营养缺乏环境时的小分子效应物。当细菌遇到营养 缺乏条件时，(p)ppGpp 被大量合成，并抑制细菌的转录活性，关闭大量代谢过程，使细菌 维持低量的生长活性，称为应急应答(strigent response)[5]。当营养条件改善后，细菌水解 (p)ppGpp，恢复正常的生长状态。研究表明，如果结核分枝杆菌体内(p)ppGpp 的合成代谢被 阻断，那么在体外营养压力条件下，结核分枝杆菌的长期存活能力遭到严重破坏，其慢性感 基金项目：教育部高等学校博士学科点专项科研基金（20100146120022） 作者简介：张华（1975-），男，副教授，主要研究方向：结核分枝杆菌蛋白质组学. zhanghua@mail.hzau.edu.cn -1-   染特征也同时失