p21Ras干预对哮喘大鼠气道平滑肌细胞表型的影响及意义.pdfVIP

p21Ras 干预对哮喘大鼠气道平滑肌细胞表型的影响及意义 中文摘要 目的:通过体外实验，探讨p21Ras干预对哮喘大鼠ASMC （airway smooth muscle cells,ASMC ） 表型的影响及意义，为进一步明确哮喘发病机制、寻找更有针对性的治疗方法提供理论依据。 方法:采用腹腔注射和重复雾化吸入卵清白蛋白法建立大鼠哮喘模型，培养正常及哮喘大鼠 ASMC ，分别取各自第3代ASMC施加不同处理因素（空白、诱导剂、FPTⅢ、诱导剂+FPTⅢ） 对细胞内p21Ras进行干预。通过透射电镜对比观察细胞超微结构的变化，免疫荧光、激光共 聚焦分别观察p21Ras 、表型转化标志蛋白α-Actin及细胞骨架的重要组成成分F-Actin 的表达情 况，蛋白印迹检测肌动蛋白α-Actin含量变化。ELISA检测细胞分泌的IL-6及Rantes 的含量，观 察细胞表型转化及合成分泌功能的改变。并采用流式细胞仪测定细胞周期，划痕实验检测细 胞迁移能力。 结果:(1)哮喘组大鼠气道上皮细胞肥大，炎症细胞广泛浸润，支气管壁厚度、支气管壁平滑肌 层厚度均较对照组显著增加。(2)对照组ASMC呈收缩型，胞浆内富含致密体，哮喘组ASMC 呈合成型，胞浆内粗面内质网、高尔基复合体、线粒体等细胞器含量丰富。(3)哮喘空白组p21Ras 荧光强度较对照空白组增强，α-Actin荧光强度较对照空白组减弱，F-Actin 出现断裂、扭曲及 排列紊乱；Western blot显示，哮喘组的α-Actin表达量较对照组明显减少，阻断p21Ras后，哮 喘组的α-Actin表达量增加，F-Actin收缩、变短，荧光强度增加。(4)哮喘空白组IL-6 （535.03 ±46.19pg/ml ）、Rantes(175.02 ±13.52pg/ml)分泌值高于对照空白组(分别为459.87 ±41.80pg/ml, 136.82±13.30pg/ml，P0.05) ，p21Ras干预后分泌量明显减低，而对照空白组较干预前无显著 差异。(5)哮喘空白组ASMC处于增殖状态的S期、G2/M期ASMC 比例分别为(9.41 ±3.99)%、(4.43 ±2.14)% 、迁移距离（0.163 ±0.009mm ）显著高于对照空白组 （P0.05 ），p21Ras干预后，ASMC 的S期、G2/M期ASMC 比例明显下降（分别为3.81 ±1.56，3.48 ±3.00，P0.05 ），迁移距离减 少(0.114 ±0.007mm，P0.05) 。 结论：哮喘大鼠ASMC 的p21Ras表达增强，p21Ras干预影响哮喘ASMC表型，细胞由合成型向 收缩型转化，同时ASMC增殖、迁移能力降低，但对正常ASMC无显著影响。p21Ras有望作为 哮喘治疗的新靶点。 关键词: 哮喘 气道平滑肌细胞 p21Ras 表型 I Effect of p21Ras intervention on the phenotype of airway smooth muscle cells in asthmatic Rat Abstract Objective:To investigate the effect of p21Ras on the phenotype of ASMC(airway smooth muscle cells, ASMC) in asthma model by interving p21Ras on asthmatic ASMC in vitro.Provide a theoretical basis for further clarify the pathogenesis of asthma,and looking for more targeted treatment methods. Methods:SD rats sensitized with ovalbumin conjuncted with Al(OH) ,were