全自动加样系统对检测乙肝标志物的影响.pdfVIP

全自动加样系统对检测乙肝标志物 的影响 目前大多数医院利用手工进行检测乙型肝炎标志物，为了使实验室在最短的时间内完成最大的工 作量,我们对 Xantus-Lisa 全自动加样系统与洗板机、酶标仪进行优化设计，寻找最佳的工作模式来提 高乙肝检测的灵敏度和特异度。 一、材料和方法 1、仪器 Xantus-Lisa 全自动加样器 1 台(瑞士 Sias 公司)，PHomo 酶标仪 1 台、iWO 洗板机 3 台（均为 安图实验仪器公司），操作软件为中文版的安图加样软件和Autosoft 分析管理软件。 2、试剂 乙型肝炎 5 项血清标志物(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb)酶联免疫吸附试验(ELISA) 试剂盒(绿科生物公司),质控血清由卫生部临床检验中心提供,批号 0810 。 3、方法 标本通过加样器实行标本和酶的 5 板快速连续分配,经人工转运微板到水温箱，通过温育、洗板、 比色、结果使用 PHomo 酶标仪进行读板判读，并通过 Autosoft 分析统软件对结果进行自动化处理。 二、结果 1、Xantus-Lisa 工作设计 我们根据一般科室的工作量设计出一套 90~180 份标本的大容量的工作 表,。为方便表述将乙型肝炎5 项血清标志物(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb)依次用 1、 2、3、4 、5 表示。通过编制这种大容量的工作表使标本量在 90~180 份之间均可使用，本工作方 案不必根据标本量的多少再行编制不同的工作计划表。这样设计的工作表经模拟后表现出较完美的阶 梯式的运行图。 2 、 Xantus-Lisa 配套的洗涤模式的选择和优化 选择临床标本 400 份(其中 200 份经手工法验证 HBsAg 阳性,S/CO1.01~88.6,及 HBsAg 浓度 0.5ng/ml 的临界值血清。固定孵育温度(37 ±2) ℃,时间(25 ±5)min,显色时间 8~10min,主波长 450nm 和参比波长 620nm 比色。泵动力高注低吸,浸泡时间 20s,吸 液高度 0.1mm,洗涤高度距微孔底部 3.0mm 等参数不变,分别采用不同洗涤模式进行洗涤,检测 HBsAg 。 结果显示,模式四(洗液总体积 320 μ,l 洗板次数 4 次,底部扫洗体积 300 μ,l 连续洗涤体积 300 μl)敏感 度、特异度和准确性最高,见表 1。 表 1 不同洗涤模式下的 HBsAg 检测结果 3、对优化模式的检验 取HBsAg 不同浓度的质控血清采用模式四分别测定 20 次,通过计算其 S/CO、 s 及变异系数(CV),并与手工法进行比较来验证方法的灵敏度和重复性,见表 2 。采用优化后的洗涤模式 后,检测不同浓度的 HBsAg 质控血清的 S/CO 均值均显著高于手工法(P0.05),且 CV 值均低于手工法。 表 2 优化后的仪器法检测不同浓度的 HBsAg 质控血清与手工法比较 三、结论 在全自动加样系统及配套外围设备组合分析中,采用不同的工作模式的设计会带来不同的工作效 率和质量,所以要在实践中不断摸索和优化,寻求一种最佳的模式使仪器发挥最大的效率,较手工操作 缩短很大一部分时间,提高了工作效率。而优化后的模式经标准品的验证,与手工操作相比 S/CO 均有所 提高,说明使用加样器及配套设行在灵敏度方面较手工法高，而在 CV 变异上又普遍低于手工法。