渐逝场荧光显微术的原理及应用.pdfVIP

第 10卷第 1期 延安大学学报 (医学科学版) JournalofYananUniversity(MedSci) Vol_10No．1 2012年 3月 MaT．2012 渐逝场荧光显微术的原理及应用 刘 洋，陈美霓 (延安大学医学院，陕西 延安 716000) 摘 要：渐逝场荧光显微术是新发展起来的一种显微镜技术。该技术利用入射光在不同折射率的两种介质表面所 产生的穿透极浅的渐逝波来激发并观察邻近界面的荧光团。渐逝场荧光显微术已在生命科学领域的研究中得到 了广泛应用，比如观察出胞作用和入胞作用，对活细胞实时动态观测和对单个分子成像。 关键词：渐逝场荧光显微术；显微镜技术；出胞作用；入胞作用 中图分类号：Q233；R329 文献标识码：A 文章编号：1672—2639(2012)O1—0010—03 Theprincipleandapplication ofevanescentfieldfluorescencemicroscopy LIU Y g，CHEN Mei—ni (CollegeofMedicine，YananUniversity，Yanan716000，China) AbstractEvanescentfieldfluorescencemicroscopyisanewlydevelopedmicroscopictechnique．Thetechniqueutili— zesthe evanescentfield illumination to detectfluorophoresthatare very Close to the specimen-·glass inter—- face．Evanescentfieldfluorescencemicroscopyhassetupafileinthefieldoflifesciencetoawiderangeofapplica- tions，suchastheobservationofexocytosisandendocytosis，livingceilsandreal-timedynamicobservation，andsin- glemolecularimaging． KeywordsEvanescentfieldfluorescencemicroscopy；Microscopictechnique；Exocytosis；Endocytosis 渐逝场荧光显微术 (evanescentfieldfluores— 介质(如水溶液或组织、细胞等)中时，在两种介质 cencemicroscopy)是近十年多来新发展起来的一种 的界面处，入射光有一部分发生反射，另一部分则透 显微镜技术。这种技术利用入射光发生全 内反射 射进入第二种介质 内，入射角和透射角之间满足关 (totalinternalreflection)时所产生的渐逝场(evanes． 系式n1sinO1=n2sinO2，其中n1和n2分别代表两种 centfield)的能量来激发荧光物质，因渐逝场的穿透 介质的折射率。当入射角增大到等于或大于临界角 深度极有限，一般仅能激发界面附近 100nm左右的 (Oc=arcsin(n／n))时，不再有光线透射进入第二 薄层区域，荧光信号不受深层荧光分子的干扰，图像 种介质，即所有的光线都发生了反射，这一现象被称 信噪比和灵敏度均得到极大程度的提高，因而使得 为全内反射。尽管从几何光学的理论来讲，当发生 观察对象非常清晰，明显地优于传统的荧光显微镜 全反射时，所有光线都在两种介质的界面上发生反 技术 。渐逝场荧光显微术可对活细胞进行实时 射而不进入第二种介质中，但实际上由于波动效应， 的动态观测，比如观察出胞作用和人胞作用现象，亦