18-α仅异构体甘草酸对化学损伤人肝细胞的保护作用.pdfVIP

中国临床药理学与治疗学 ◇基础研究 ◇ 中国药理学会主办/ , // . ;:一仅异构体甘草酸对化学 损伤人肝细胞的保护作用 张群 ,吴培 ,张建军。 东南大学附属中大医院感染病科,南京,江苏; 泸州医学院附属医院感染病科,泸州 ,四川 摘要 目的:研究异构体甘草酸 异甘草酸 纤维化、调节免疫、抑制 内流、防止细胞凋亡 镁 对半乳糖胺和四氯化碳 损伤 以及增加内源性类固醇产生等多种功效 】 。 培养人肝细胞 一的保护作用及机制。方法: 第四代甘草酸制剂异甘草酸镁,主要成分为 培养,用异甘草酸镁进行保护,再经 ?一 异构体甘草酸 ,其药理功效的探讨既往多 或 处理。观察细胞上清活性氮终产物 以临床病例分析为主,本实验以体外培养人肝细 含量及细胞线粒体膜电位。结果:浓度为 胞 作为护肝药物作用体系,进一步研究 一 异构体甘草酸对半乳糖胺 ? 或四氯 / 时,异甘草酸镁能显著减少 ? 化碳损伤人肝细胞的保护作用及机制。 和 损伤细胞导致的 释放 ., 明显升高 损伤所降低的细胞线粒体膜 材料与方法 电位。结论:/ 的异甘草酸镁对 ? . 实验细胞 人肝细胞株 ? 购买 自华西医 和 致人肝细胞损伤有明显保护作用,其机制 科大学基础医学院医学生物学与细胞学实验室。 与抑制细胞 释放,改善细胞线粒体膜电位作 . 药品、试剂 规格: : ;批 用相关。 号: 为江苏正大天晴药业股份有限公司 关键词 半乳糖胺;四氯化碳;甘草酸;肝细胞;药 产品。胎牛血清和 培养基为 公司 物作用 产品, ? 和邻苯二甲醛 为 ? 产品,为重庆博艺化学试剂公司产 中图分类号: . 品, , 一二氨基萘 为成都市科龙化工试剂 文献标识码: 厂产品,三氯乙酸 天津市科密欧化学试剂 文 章 编 号: ? ?公司产品,聚乙二醇辛基苯基醚 一 为 生工生物工程 上海公司产品。 甘草酸类药物是目前临床最常用的保肝药, . 仪器 全自动生化仪 日立,酶标仪 具有抗炎、抗氧化、抗肝脏毒物、稳定细胞膜、抗肝 ,荧光 分 光 光度 计 一 ¨ 收稿 一¨一 修回 ,荧光倒置显微镜 ,超净工 张群,女,硕士,主治医师,研究方向:肝病的基础与临床。 作台 一 ,苏州净化设备有限公司 ,恒温: ? :. 培养箱 一,上海科析试验仪器厂 ,光学 张建军,通信作者,男,博士,主任医师,教授,硕导,研究方向:感 染性疾病分子生物学研究。 显微镜一 , ,低温高速离心机 ?: ? : . , ,恒温干燥箱 ; 卜? ,上海科析试验仪器厂 ,恒温水浴箱 本实验采用荧光探针法,测定细胞上清含 一 ,北京医疗设备厂 ,超低温冰箱 量。 细胞 上清 中加入 . / 。 ,使反应值为 左右,室温避光反映 ,加入 . /,终止反应。 . 细胞培养 将购自华西医科大的 ? 细胞复苏,传代供用。用含 / 胎牛血清的 ? 后在/ 处测定荧光值,以此计培养液调细胞密度为 × / ,接种 算细胞释放的含量。 于 孔培养板,置。孵箱中培养。 . 线粒体膜电位观察 本实验采用 一 线 .和处理 肝细胞预培养 , 粒体膜电位检测试剂盒 染色测定培养人肝细胞 分别用以 ? 、 、 、 / 浓度共培养 线粒体膜电位。培养体系中加入 /? 、 、 、; 、 、 、 / 浓度共 染液,反应 后,吸弃染液,用荧光显微镜观 培养 、 、 、 ,以天门冬氨酸氨基转移 察细胞荧光强弱。在线粒体膜电位较高时, 一 聚集在线粒体基质中,形成聚合物,产生红色荧 酶 和乳酸脱氢酶 为指标,探索最佳 制备损伤模型条件。选择 ? / 作 光;在线粒体膜电位较低时, 一 不能聚集在线 用, / 作用损伤细胞为模 粒体的基质中, 一 为单体,产生绿色荧光。通 型组。 过红绿荧光的相对比例可以衡量线粒体膜电位的 .的配制和处理 参照既往甘草甜素研 高低。 究文献 ,药物浓度在 / 至 / . 统计学处理 所有数据以均数±标准差 ± 表示。采用 .中的 护肝效果最佳。本研究取原液和胎牛血清, 按 : 的剂量加入细胞上清中,使的终浓度对组间差异进行统计分析,. 为 分别为 . 、 . 、/组,用于构建肝细 差异有统计学意义。 胞保护体系。结果 选择 ? / 作用 、 .对 含量的影响 浓度为 / / 作用损伤细胞,用于观察对 的 显著降低和 ?所致的细胞细胞的保护作用。不同终浓度见上述 的 于 增加 . ,表。 细胞预培养后加入。 . 人肝细胞上清终产物 含量测定 表 对含量的影响 士 ,,与模型组比较 ;与溶剂对照组比较 .对线粒体膜电位的影响 浓度为 所致的细胞线粒体膜电位降低无显著作用 /