T-RFLP技术在人肠道柔嫩梭菌类群的组成分析中的应用.pdf

696 ChineseJournalofMicroecology，Aug．2009，VoL21No．8 文章编号：1005-376X(2009)08-0696-05 【论 著】 T．RFLP技术在人肠道柔嫩梭菌类群的组成分析中的应用 柳欣源，申剑，王婷婷，李曼，赵立平，庞小燕 (上海交通大学生命科学技术学院微生物分子生态与生态基因组学实验室，上海 200240) 摘【要1 目的 建立能快速筛查和比较大规模人群肠道中柔嫩梭菌类群组成结构的T-RFLP(末端限制性片 段长度多态性)。方法 采用T-RFLP技术特异性地分析柔嫩梭菌类群的组成，考察该方法的重复性和灵敏度。用 该方法对 15个志愿者肠道中的柔嫩梭菌类群进行分析，并与DGGE方法分析的结果进行对比。结果 T—RFLP方 法重复性高，最低能检测到群落中1％的细菌，其结果与DGGE的分析结果具有较好的一致性。结论 本研究建立 的柔嫩梭菌类群特异性的T-RFLP方法能够对大量肠道样品中柔嫩梭菌类群的结构进行快速、有效的筛查和比较。 【关键词】 T-RFLP；柔嫩梭菌类群；多样性 【中图分类号】Q785 【文献标识码】A TheapplicationofT-R P inan~yznigClostridium Z J，lgroup inhumangutmi· crobiota 21uXin—yuan，SHEN Jian，WANGTing—ring，I2Min，ZHAOLi—ping，PANG Xiao-yan (LabofMolecularMicrobialEcologyandEcogenomics，SchoolofUfeScienceandTechnology， 彻咖 JiaotongUniversi- ty，Shanghai200240，China) 【Abstract】 Objective Toestablishagroup—specificTerminalRestrictionFragment Polymorphisms(T- RFLP)methodtoanalyzethestructureofClostridium t啪 groupinhumnagutsamplescollectedfromlarge-scalepopula- tlons．Method Thereproducibilityandsensitiviyt ofColstridium 机m groupspecfiicT—RFLPw8sdetermined．T-RFLP andDGGEwereusedtonaalyzethefecalClostridium msubgroupof15humansubjectsnadtheresultswerecompared toevaluatehteconsistencyofthetwotechniques．Result TheClostridium Z Mm group—specfiicTR·FLPmehtodwasshown tobeofhishreproducibilitynadhadthedetectionlimitdownto1％ ．Th eresultofT—RFLPwasingoodcoherencewiht that of DGGE．Conclusion Thisgroup—specfiicT-RFLPmehtod couldbeusedtoefficientlyscreenandcomparethestrucutre ofClostridium m groupinlargequantityof fecal samples． 【Keywords】T—RFLP；Colstrd／／um却咖 group；Diversity 人体肠道中定植着复杂的微生物群落，其微生物 术，具有高通量、高重复性、高灵敏度以及 自动数字化 细胞总数达 1OH个，种类超过800种 J。肠道菌群参 输出等优点，可以在短时间内对大量样品中细菌群落 与宿主的许多基本生理代谢活动，在宿主的营养、免