β-连环蛋白shRNA表达载体的构建及转染研究.pdfVIP

中华肿瘤 防治杂志 2009年 8月第 16卷第 15期 CHINJCANCERPREVTREAT，August2009，Vo1．16 No．15 《实验研究l p一连环蛋白shRNA表达载体的构建及转染研究 王明玉 ， 赵云霞， 盂凯 泰安市中心医院普外科 ，山东 泰安 271000 ConstructionofeukaryoticvectorexpressingshRNAof13-cateninandtransfection intogastriccancercells WANGM ing—yu，ZHAO Yun一：ria，MENG Kai CentralHospitalofTaian，Taian271000，P．R．China 【摘要】 目的：设计并构建 pI连环蛋 白(p—cate— [ABsTRAcT] OBJECTIVE：Toconstruct0一cateninshRNA nin)shRNA 真核表达质粒 ，并转染 胃癌细胞株 eukaryoticexpressionvectorswhich aretransfected into AGS AGs。方法 ：以 7-catenin为靶基 因设计具有短 inordertOsilencepcateningene．METHODS：TheshRNA 发 夹结构的模板寡核苷 酸，退 火形成 互补 双链结 。lig。nucleotidestargeting for8一cateningeneweresynthesized 构 ，构建 shRNA 真核表达载体 pGPU6—8一cate— andcloned intopGPU6． pGPU6一e—catenin 1，2 wereidentifi nin1，2。脂 质 体 转 染 人 胃癌 AGS 细 胞 株 ， catedbysequencingand transfected intoAGSbylipofectamine RT—PCR、蛋 白质 印迹 法检 测 干扰 效果 。结 果 ： reagent． The gene silencing effects were determined by 重组质粒 pGPU6—8一catenin1，2经酶切和 测序鉴 RT PCR and W estern blot． RESULTS：shRNA expression 定 。转染 AGS细胞后 ，RT—PCR 和蛋 白质 印迹 vectorsweremeasuredbyrestrictedendonucleaseanalysisand 法 显 示 ，pGPU6一B—catenin-2 明 显 下 调 catenin partialnucleotide sequencing． pGPU6一p—catenin-2 slowed 基 因转录和蛋 白表 达。成功 筛选稳 定传 代 细胞 downtheexpressionoff}cateninevidently．Steadycellline 株 ，绿 色荧光蛋 白表达 率 94 。结论 ：成 功构建 wasselected successfully，and expression rateofGFP was 了 t?-catenin基 因 shRNA 真 核 表 达 质 粒 94 ．CoNCLUS10NS：shRNA ofGcateninrecombinantwere pGPU6Bcatenin一2，稳定转染 胃癌细胞株 AGS， establishedsuccessfullybyRNAitechniqueandtransfectedin 为进一步研 究 catenin在 胃肠道恶性肿瘤 中的 toAGS cells．Itsupportsfurther investigation oftheroleof 作用提供 了理论参考 。 一 catenin ingastriccancer． 中华肿 瘤防治杂志 ，2009，16(15)：115l 1154 Ch JCanc