家蝇免疫血淋巴抗HeLa肿瘤细胞蛋白的筛选及纯化.pdfVIP

时珍国医国药2011年第 22卷第 11期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2011VOL．22NO11 家蝇免疫血淋 巴抗 HeLa肿瘤细胞蛋 白的筛选及纯化 魏 洪 ，吴建伟 ，王硕石 ，国 果 ，付 萍 (贵阳医学院，贵州 贵阳 550004) 摘要 ：目的 从家蝇3龄幼虫血淋巴筛选具有抗肿瘤细胞HeLa(宫颈癌细胞)的蛋白。方法 采用固相萃取、反相高效液 相色谱分离、四 甲基偶氮噻唑蓝 (MrITI1)比色法 ，从 热诱导家蝇 3龄幼虫免疫血淋 巴筛选抗肿瘤 多肽 。结果 经 10％ ～ 50％乙腈洗脱cl8固相萃取柱，获得mpl、mp2、mp3、mp4、mp5等5个具有抗HeLa的活性组分，以40％乙腈萃取组分活性 最强达 38％，而顺铂抑制率为 57％，经反相高效液相色谱分析 ，该固相萃取活性组分 由2个片段组成，分别为出现在 280 nm波长下24rain和 29min，对HeLa具有抑制作用，与顺铂的抗肿瘤活性相接近。结论 家蝇 3龄幼虫血淋巴具有抗He— La的mpl、mp2、rap3、mp4、mp55个组分，MP4活性最强，由2个分子量为 16KDa成酸性的多肽片段组成。 关键词 ：家蝇幼虫： 血淋巴； 肿瘤细胞： HeLa； 纯化 D0I标识 ：doi：10．3969／i．issn．1008—0805．2011．11．015 中图分类号 ：R284．2 文献标识码 ：A 文章编号 ：1008-0805(2011)1l一2606~2 IsolationandPurification ofProteinwithAnti—heLaActivity from theImmuned Hemo- lymph ofHousefly Larvae WEIHong，WUJian—wei ，WANGShuo—shi，GUOGuo，FUPing (DepartmentofParasitology，GuiyangMedicalCollege，Guiyang550004，China) Abstract：ObjectiveToisolateandpuritfytheproteinwithanti—tumorcellheLaactivityfromthethree—agedMuscadomestica larvaehemolymph．M ethods ProteinoftheMuscadomesticalarvaehemolymphinducedbyheatwereisolatedandpurifiedhysolid phaseextraction(SPE)andreversephasehighperformanceliquidchromatography(RP—HPLC)．Thenthepeptideswithanti—he— LaactivityweresievedbyMTTassay．ResultsSupermatantelutedwith10％ 一50％ acetonitrile(ACN)inaqueoussolutionbysol— idphaseextraction．WenamedasMuscadomesticaantitumorpeptides(mpl、rap2、mp3、mp4、mp5)，ofwhich，40％ wasthenlost active．Twoanti—tumorpeaksappearedafterpurificationbyRP—HPLC．Conclusion Therearefivesubstanceswhichhaveanti — heLaactivityintheMusca domestica larvaehemolymph．MP4 isa Novelantitumorpeptide．Theprecisemolecularweightof MTP1is 16900．8Da． Keywords：Muscadomesticalarvae； Hemolymph； Tumorcells； HeLa； Purification 肿瘤是严重威胁人们生命和生活质量的主要疾病，开发天然 1 材料与仪器 抗癌药物是 目前抗肿瘤药物研究的重要领域。抗菌肽