柔肝化纤颗粒对肝纤维化大鼠肝细胞凋亡的影响.pdfVIP

2011年第 12期．总381期 柔 肝 化 纤 粒 对 肝 纤 维 化 大 鼠 肝 细 胞 凋 亡 的 影 响 杨删 王婷 王振常z (1．广西中医学院 广西 南宁 530001；2．广西中医学院第一附属医院 广西 南宁 530021) 中图分类号：R3 文献标识码：A 文章编号：1007—0745(2011)12—0122—03 摘要墓目的譬探讨柔肝化纤颗粒抗肝纤维化的；作用效果 带_Jo方 采用j噶氯化碳(Ccl0复合法肝纤维化大鼠模型，以秋水仙碱 及大黄蛾虫丸为对照’¨爆药物对肝脏组织病理学、肝细胞凋亡情舰 肝级织激活索A ^TjA)桃 的影响。结果与病理模型 纽大鼠相 讦颗粒海 组 占旬趋于正，纤 籼 于l模型组 )，丹 泡的凋亡减少 P(髯0．o1)，免疫组化及RT—P(R检测 TA的表达低于模型组 )0．01)。i结论：柔肝化多 粒能够显著改 肝纤维化大鼠肝组 织的病理变化具有明显的抗肝纤维化作用’其作用机制j可能与调控AcTA表达，从而减少肝自鹏 的凋亡爱 蝴 壮屉迳瘀煎 -肝纤维化 凋亡一ACTA 奏验研究≯ 一0。。奠 。 奠。 … 柔肝化纤颗粒是在全国名老中医林沛湘及关幼波教授治疗 胃液体量为 lOmlk／g体重 每 日1次，其浓度及等效剂量按体表 肝炎肝硬化有效验方基础上组方而成的经多年临床应用．显示出 积折算。 良好的保肝、抗肝纤维化作用 本研究旨在探讨柔肝化纤颗粒对 1．4标本制备 CC1诱导的肝纤维化大鼠肝细胞凋亡及其相关基因表达的影响， 以上各组分别于用药治疗后6周、12周，禁食 12h后称重，随 进一步阐述该方抗肝纤维化的分子机制。 机选取 8只大 鼠称重．经 l％戊巴比妥麻醉后股静脉采 ．后处死 1．材料与方法 剖取肝脏．取肝组织右叶相同部位组织一块入 10％甲醛溶液作常 1．1实验动物 规石蜡切片．余新鲜肝组织液痰速冻保存以备RT—PCR检测用 ． 健康清洁级 SPF大鼠120只。雌雄各半，体重 220～250g,广西 1．5组织学检查及判定标准 中医药研究所提供 各组肝组织相同部位石蜡切片苏木精一伊红 H【日染色光镜观 1．2药物与试剂 察。HF的分级参照文献 【I标准，将HF分为6级．正常为0线 每张 柔肝化纤颗粒组成：黄芪45g，牡蛎30g．黄精 20g．枸杞20g．薏 切片随机选取 5个视野，分别记录病理分级，并取其平均值作为该 苡仁 45g，橘红 10g，泽兰30g，炒鸡内金 15g，鳖甲30g，虎杖20g， 动物肝脏的病理分级 丹皮 12g，大枣 15g，f药物免煎颗粒剂由广西中医学院第一附属医 1．6检测指标 院药剂科提供) 大黄蠊虫丸 (广东阳江制药厂有限公司．批号 1．6．1原位末端脱氧核苷酸转移酶(TAT)标记法 fTUNEL)检 秋水仙碱(云南吴邦制药有限公司，批号 。 测肝细胞凋亡，计算凋亡指数 (apoptosisindex,AI)：光镜下观察 CCI分析纯f中国医药集团上海化学试剂公司)胆同醇(汕头市光 TUNEL染色，数5个以上高倍视野，每个视野计数 100个细胞r”的 学化学厂)．1％戊巴比妥钠，大 鼠GAPDH上游引物：5CATGAC— 阳性细胞f细胞核染色呈棕黄色)数，取其平均值即为AI CACAGTCCATGCCATC3．下游引物：5CACCCTGTrGCTGTAGC— 1．6．2免疫组织化学检查 采用石蜡包埋常规切片 sP法． CATATFC3，全 长 450bp；ActivinA 上 游 引物 ：5GGACC— ACTA单克隆抗体以1