菜豆黄花叶病毒外壳蛋白（CP）序列分析.pdfVIP

农业基础科学 现代农业科技 2011年第 10期 菜豆黄花叶病毒外壳蛋白(CP)序列分析 王 信 1,2 王晓鸣 (青海省农林科学院植物保护研究所，青海西宁 810016； 中国农业科学院作物科学研究所 国家农作物基因资源与基因改良重大科学工程) 摘要 以菜豆黄花叶病毒分离物 、蚕豆、豌豆为试验材料 ，进行 了菜豆黄花叶病毒外壳蛋白(CP)序列分析。结果显示．目标片段中包含 819bp的外壳蛋 白序列 ，编码 273个氨基酸。分离物 的外壳蛋 白基 因核苷酸和推导编码蛋 白质的氨基酸序列的同源性分另Ij为 98．7％ ~ 99．9％和98，9％一100．0％。与65个菜豆黄花叶病毒外壳蛋 白进行序列同源性和系统进化树分析 的结果表明，菜豆黄花叶病毒青海蚕豌豆 分 离物与云南蚕豆分离物同源性最高。外壳蛋 白的序列特征揭示 ，NAG为菜豆黄花叶病毒 中病毒的蚜传相关基序 关键词 菜豆黄花叶病毒 ；蚕豆和豌豆分离物：外壳蛋 白 中图分类号 Q78 文献标识码 A 文章编号 1007—5739(2ol1)lO一0044—02 菜豆黄花叶病毒 (Beanyellowmosaicvirus，BYMV)是蚕 表 1 反应混合液 1m ( ) 豆和豌豆生产 中的一个重要病原 ，弓1起蚕豆和豌豆花叶 试剂 添加量 病 ，该病害在很多国家均严重发生过口-6]。2004--2006年 ，笔 M—MLVRT—buffer 4．O 10mmol／LdNTPs 4．O 者对 中国蚕豆 、豌豆生产主区进行调查 ，发现发生最普遍 、 40U，uLRNasin 1．O 最严重的是 BYMV引起的病毒病 ，发生率均在 10％以上 ，一 10pmol／IxLBYMV下游 引物 1．O 200U／txLM—MLV反转录酶 O．5 些蚕豆田的BYMV侵染率超过 75％i7--91。BYMV粒子呈线状 ． DEPC处理水 6．5 通过蚜虫以非持久方式进行传播 ，也可通过机械传播。目前， 已经对多个 BYMV不同寄主分离物的外壳蛋白(Coatprotein． CP)序列进行了测序和特征分析[8,10-11】，其CP片段中包含819 个核苷酸 ，编码 273个氨基酸 ，包含 1个与蚜传相关的基序 DAG。BYMV也有3末端和 Poly(A)尾I】21，这与其他马铃薯 Y 病毒属成员的CP基因结构相 同。 1 材料与方法 1．1 试验材料 1．3 数据分析 莱豆黄花叶病毒分离物分离 自青海的蚕豆及豌豆病 利用 DNAMAN软件进行外壳蛋 白基因序列和氨基酸 株，经鉴定后，于无病毒、健康的蚕豆和豌豆上繁殖llJ，用于 序列进行分析。 总RNA提取。蚕豆、豌豆的生长环境为温室环境 ，繁殖菜豆 2 结果与分析 黄花叶病毒分离物的蚕豆 、豌豆品种分别为青海 11号、草 2．1 外壳蛋 白基因的扩增与克隆 原 20号。 分标样将表现花叶症状 的叶片进行总RNA提取 ，通过 1．2 试验方法 特异扩增和琼脂糖 电泳 ，获得与 目标条带大小相近的片段 1．2．1 设计引物 [JJ。设计外壳蛋 白基因序列 引物 (正向、反向 (图 1)。克隆测序表明片段大小为 1071bp，比对 结果表明