可溶性HLA—G-肽复合物的体外制备与纯化.pdfVIP

维普资讯 第 37卷第 3期第 377页 华中科技大学学报 (医学版) Vo1．37 No．3 P．377 2008年 6月 ActaMedUnivSciTechnolHuazhong June 2008 厂 一 一 、 ． ． ：实验研究 ； ／ … 一 一 + ． 可溶性 HLA—G一肽复合物的体外制备与纯化* 钟茂华 翁秀芳 梁智辉 夏芳珍 李佳楠 陈雪玲 吴雄文△ 华 中科技大学同济医学院基础医学院免疫学系，武汉 430030 摘要 目的 探讨可溶性 HLA_ 肽复合物 的体外制备与纯化 。方法 原核高效表达 的 HLA—G重链及轻链 (B2m)在抗原肽 (人工合成九肽 NH2一KGPPAALT C00H)的存在下，通过稀释复性折叠成 HLA_ 肽复合物，采用凝 胶过滤层析对折叠复合物进行纯化。利用特异性抗体 (mAbW6／32和兔抗人 口2m抗体)进行 ELISA和 Westernblot对 纯化产物进行鉴定。结果 折叠复合物中，主要含有HLA～G重链聚合体、HLA_ 肽复合物及 p2m3种成分，纯化后主 要为HLA_ 肽复合物。结论 成功地获得纯度较高的可溶性 HLA—G-肽复合物单体，为进一步研究 HLA-G的生物学 功能奠定 了基础 。 关键词 HIA_ 肽复合物 ； 稀释复性 ； 凝胶过滤层析 中图法分类号 R392．12 Preparation andPurificationofSolubleHLA—G-peptideComplexinvitro ZhongM aohua，W engXiufang，Liang Zhihuietal DepartmentofImmunology，SchoolofBasicMedicalSciencesTongJiMedicalCollege， HuazhongUniversityofScienceandTechnology，Wuhan430030 Abstract Objective ToprepareandpurifysolubleHLA—G-peptidecomplexinvitro．Methods TheheavychainofHLA— G1andl?2m wereexpressedhighlyasinsolubleaggregatesinE．coli，andthenthetwosubunitswererefoldedtOform anHLA- G-peptidecomplexbydilutionmethodinthepresenceofanantigenicpeptide(NH2一KGPPAALTL—COOH)andpurifiedbyge1 1aminaranalysis．ThepurifiedproductsweredetectedbyELISA andWesternblotwithmAbW6／32andrabbitanti—human132m antibody．Results TherefoldedcomplexwascomposedofH chain aggregates，HLA-G-peptidecomplexand82m．Thepuri— fledproductwasmainlyH IA-G-peptidecomplex．Conclusion TherefoldedHLA_ peptidecomplexwassuccessfullypurified andtheproductswereconfirmedbythepracticalimmunologicalmethod．Thisstudylaidthefoundationforthepreparationof HLA—G—peptidecomple