木质包装中松材线虫的实时荧光PCR检测.pdfVIP

勉扬缘 2011．37(5)：129—134 PlantProtection 木质包装中松材线虫的实时荧光 P( 检测 郭立新 ， 段维军 ， 顾建锋 ， 闻伟刚 ， 黄海泉 (1．北仑出入境检验检疫局，宁波 315800； 2．宁波出入境检验检疫局 ，宁波 315012) 摘要 松材线虫是进境木质包装中的重要检疫对象之一。本研究以进境木质包装中截获的 12种伞滑刃属线虫，包 括4种不同来源的松材线虫、3种不同来源的拟松材线虫、豆伞滑刃线虫、大尖尾伞滑刃线虫、阿苏里伞滑刃线虫、 伯氏伞滑刃线虫及拟小刺伞滑刃线虫为材料，进行实时荧光 PCR检测。结果显示，仅松材线虫可观察到明显的荧 光强度变化 ，而其他线虫的荧光强度没有变化。通过研磨样品的方法，提取单条松材线虫的DNA，进行实时荧光 PCR试验，检测成功率为 100 ，且不论是雄虫、雌虫或幼虫均能检测出来。该研究对于我 国口岸进境木质包装 中 松材线虫的检测具有一定的实际意义。 关键词 木质包装； 松材线虫； 实时荧光PCR； 检测 中图分类号： S41—30 文献标识码： A DoI： 10．3969／j．issn．0529—1542．2011．05．024 DetectionofBursaphelenchusxylophilusfrom woodspackagingusnigreal-timePCR GuoLixin，DuanWeijun， GuJianfeng。，WenWeigang。， HuangHaiquan (1．BeilunBureauofEntry-ExitInspectionandQuarantine，M b0 315800，China； 2．M 的BureauofEntry-ExitInspectionand uQarantine，M 幻 315012，China) Abstract Pinewoodnematodeisoneofthemajorquarantinepestsfromimportedwoodspackaging．Inthisstud— Y，twelveBursaphelenchusspecies，includingfourisolatesofB．xylophilusinterceptedfrom woodspackagingim— ported，threeisolatesofB．mucronatus，oneisolateofB ．doui，oneisolateofB．macromucrona tus，oneisolate 0fB．arthuri，oneisolateofB．burgermeisteri，andoneisolateofB．paraparvispicularis，weredetectedusinga real—timepolymerasechainreactionassay．TheseresultsshowedthatfluorescentsignalwasdetectedonlyinB．xy— lophilusandnosignalsforothersamples．W henDNA wasextractedfrom onenematodebygrindingmethod，the successrateofdetectionwas100％ ，andallspeciesofnematodes，includingmale，femaleorlarva，weredetected successfully．Thestudywashelpfulfordetectionofthepinewoodnematodeinimportedwoodspackaging． Keywords woodspackaging； pinewoodnematode； real—timePCR； detection 由松材线虫 (B rs以声e￡Pc 5xylophilus)弓l )等近缘种之间的形态学特征存在重 起的松树萎蔫病是松树上的重要病害_】]。目前，美 叠及变异现象，检测上容易造成误判、漏判，而在 口岸